青霉素酰化酶产生菌分子育种及产酶条件研究.pdfVIP

维普资讯 ‘中国抗盥蠢条意剐 89I ¨ e【)t{93～3柚 一 ～ … 一 1 ；论 著 ； ～… … … J 青霉素酰化酶产生菌的分子育种及其产酶条件的研究 杨秀举 吴芝清 宋陆锋 王彦芳 张贺迎 汪菥珠 吴经寸 (河枇大学生物工程斫宽所，睬定 填耍 甩Ee0R1分剐酶切质牡pAc 184和EclD8 色体 ·经莲接、转让 i誊选 ·得捌 穗 克隆了青霉素酰他酶基 因的转化体一C600~pPAHDt-7) 重组质粒pPAHDl在不 同受体 姗 胞 冉 的酶活表达水平相肇 2O倍。据此橱 建的工程苗其膏蒜索酰化酶活比出发菌株提高 4～ 5倍。 本 文还对工程菌的产酶条件连行了研究 关■诃 青霉素酰化酶，基 因克隆J鸟枪克隆法’产酶条件 提高酶产詹是酶制剂工业的重要课题之 供 ， 一 常规的诱变育种是优化菌种 的 有 效 手 5．牯质赛 氏菌 fSerralia marce$cc,t．t．~) 。 段，但对经多次诱变，产酶量已达到一定水 中国科学院微生物研究所孙晋武赠， 平的菌株 ，仍采用传统 的方法 已很难 奏 效， 6．AS1．1439(pACYCI84) 购 自中 以致单位产量徘徊不前。借助遗传工程技术 国科学院微生物研究所J 可打破这种疆局。 7．7118 南开大学蒋如璋赠。 我们用遗传工程手段将Ec108的青霉 素 ：、培养基厦培养条件 酰化酶基因克隆到载体pACYC184中．通过 LB培养基 “t供斜面菌种培养，37C， 受体菌的筛选以及产酶条件的研究，获得一 24小时。BYSP 培养基 用于筛选重组转 株既高产生活力又强的菌 株Ec108(pPAHD 化体，培养于28℃，24小时。软琼脂复盏培 1)，其特点是生长逮度快 ，在 国产原料培养 养基 t用来筛选克隆了青霉素酰化酶基 因 基中产酶 良好，是一株有工业生产潜力舸菌 的转化体。复盖后的琼脂平皿培 养 于28℃， 株。 24小时。 4．摇瓶发酵培养基 (％)。蛋 白胨1．5， 材科与方法 NaC】O．1、苯乙酸0．15、牛肉膏0．15。 自来 一 、 菌株与质粒 水配制，oH7．O～7。2。250m1螺 口带盖三角 1．C600、HB101 中国科学院微生 物 瓶，装液量3oral，置于每分钟振120次往 复 研究所购得， 式摇床上 ，24℃，培养22小耐。 2．LE392 医学科学院血液学研 究 所 上述培养基在必要耐添加抗生索 ，其浓 王立 赠 I 度为 四环素 (TC)159g／ml，氯霉 素 (CM) 3．K802 上海生物化学研究所龚臻臻 10#g／ml、链霉素 (ST)300# ml、青 霉 素 赠 ’ G(PG)3mg／ml。 4．Ecl08 华北药厂抗生素研 究所 提 三 主鲁亿学试jiI ·393 ·