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一、材料(一)仪器(见附录6．6)(二)器皿(见附录6．6)(三)菌种1．大肠杆茵K802、hsdR+、hsaM+、gal、met、SupE。2．大肠杆菌TGIr r—supEΔ(1ac-proAB)hsd?Δ5F[traD36proAB+ lac Iq lacZ? ΔM15]。(四)培养基??? 1．LB液体培养基.??? 配制LB液体培养基3400毫升，分装于10毫升试管中，每支试管2毫升，每组1支。另外再分装30毫升LB于100毫升三角瓶中，每组1瓶。?? ?2．LB固体培养基。? 将上述配制的3000毫升液体培养基分装于250毫升的三角烧瓶中，每瓶100毫升。加入2克琼脂，于10342kPa(15磅／时2)，灭菌20分钟，每组一瓶。??? 3．另配100毫升LB不调pH的溶液(pH为61)，分装于试管5毫升／支于103.42kPa(15磅／时2)灭菌20分钟。??? 4．抗菌素；??? 1)氨苄青毒索(Amp)用前在无菌试管中，用灭菌水配制，母液浓度为100毫克／毫升。??? 2)链霉素(Str)用前在无菌试管中，用无菌水配制母液浓度为50毫克／毫升。(五)试剂??? 1．50mmol/L CaCL2溶液；称取无水氮化钙(上海金山果尖塔化工厂，分子量0.99分析纯)2．8克，加重蒸水至500毫升，分装于150毫升，三角烧瓶中，每瓶50毫升，每组l