药敏实验课件.pptVIP

实验八 纸片法药敏试验 一、目的要求 1、 通过本次实验，了解药敏试验在实际生产中的意义。 2 、掌握药敏试验的基本原理。 3、掌握纸片法药敏试验的操作程序和结果判定方法。 二、原理 药敏片上含有的抗菌药物向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，在药敏片周围形成抑菌圈，依据抑菌圈的大小确定药物抗菌能力强弱。 四、实验材料 1、菌种 ： 葡萄球菌，培养16~18h的幼龄菌液；大肠杆菌，培养16~18h的幼龄菌液。 2、药敏片：阿莫西林、氟苯尼考、丁胺卡那、氧氟沙星。 3、器材： 生化培养箱、 灭菌营养琼脂培养基、水浴锅、灭菌平皿、 镊子、记号笔、灭菌棉拭子、酒精灯、直尺。 抗菌药物纸片的制备 1、将优质的滤纸用打孔机打成直径6mm的圆片，每100片放入一小瓶内，160℃干热灭菌1~2小时，或用高压灭菌（压力0.105MPa，30min）后在60℃条件下烘干。 2、抗菌药物的浓度 可参考以下标准 青霉素200IU/ml 其它抗菌素1mg/ml 磺胺类药物10mg/ml 中草药制剂1g/ml 抗菌药物纸片的制备 3、吸取抗菌药物溶液1ml，加入100片纸片中，置冰箱内浸泡1~2小时，如立即试验可不烘干，若保存备用，可用下法烘干:将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于37℃温箱内保持2~3小时即可干燥。 4、将制好的各种药物纸片装在无菌小瓶中，置冰箱内保存备用 五、实验方法步骤 1.无菌操作取大肠杆菌的培养物，以密集均匀划线法，接种于普通营养琼脂平板上。 2．贴药敏片： 用灭菌镊子夹取已制备好的抗菌药物纸片，按标记位置，轻轻贴在已接种细菌的琼脂培养基表面，一次放好，不能移动，各纸片间的距离要大致相等。 五、实验方法步骤 3、培养 将平板底部向上，倒置于37℃恒温温箱中，培养18小时后观察结果。 4、结果判定 在药敏片周围出现一个无菌生长的圆圈，称为抑菌圈。 结果判定 青霉素的敏感标准 ：抑菌圈直径小于10mm 耐药 ， 10~20mm中度敏感 ， 大于20mm敏感。 其它抗菌素及磺胺药的敏感标准 ：抑菌圈直径小于10mm 耐药 ， 11~15mm中度敏感 ， 大于15mm敏感。 中药的敏感标准 ：抑菌圈直径小于15mm 耐药 ， 15mm中度敏感 ， 15~20mm敏感。 六、注意事项 1、应在无菌条件下操作，实验完毕后及时灭菌处理，防止散毒。 2、营养琼脂平板的厚度，太厚，抑菌圈变小；太薄，水分蒸发，细菌不生长。 3、营养琼脂平板应完全凝固后再接种细菌，最好在4℃冰箱中放置一段时间。 六、注意事项 4、细菌接种量 细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小。 5、药敏片之间的间距及药敏片与平皿边沿的距离。 ？思考题 1、 药敏试验中为什么要用幼龄菌作试验？ 2、药敏试验结果是临床用药的唯一依据吗？ * * 三、在生产中的应用 检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有效药物，用于临床治疗，对控制细菌传染病的流行至关重要。 操 作 方 法