志贺氏菌的检测.docVIP

志贺菌检测技术 摘要：志贺氏菌是引起人类肠道疾病常见的病原菌，在我国感染性腹泻病原菌中高居首位。为了能够有效地预防、治疗和控制水或食源性传染病，对水或食品中志贺氏菌的快速检测与鉴定显得十分重要。本文主要介绍了志贺氏菌的各项检测技术及其优缺点，并对志贺氏菌的检验技术进行了展望。 关键词 : 志贺氏菌；检测技术；展望 前言：志贺菌是引起食源性疾病的常见病原。人体在感染后都可能出现恶心、呕吐、腹痛等症状,对于症状不典型者,极容易被误诊为沙门菌、致泻性大肠埃希氏菌或霍乱弧菌感染,影响治疗而导致慢性感染或带菌者,这一方面延误了患者的早期治疗,另一方面扩大了病原体的传播。因此,迫切需要对病因进行准确而快速的诊断。目前,包括我国在内的许多国家对这类致病菌的检验,大多仍沿用传统的细菌培养及鉴定方法,步骤繁琐,检验周期长,远不能满足应对突发公共卫生事件上,及时诊断、结果准确、敏感性和特异性高的要求。 正文 志贺氏菌是一类兼性厌氧、不产生芽孢的革兰氏阴性杆菌。长约2～3μm、宽0.5～0.7μm、杆状或短杆状，不形成荚膜，无鞭毛，多数有菌毛；营养要求不高，能在普通培养基上生长；最适生长温度为37℃，最适 pH 值为 6.4～7.8。志贺氏菌可分解葡萄糖，产酸不产气。VP 实验阴性，不分解尿素，不形成硫化氢，不能利用柠檬酸盐或丙二酸盐作为唯一碳源。 志贺氏菌属细菌的抗原由菌体抗原(O)及表面抗原(K)组成。O 抗原可分为群特异性抗原和型特异性抗原，型特异性抗原可用于区别菌型。K 抗原可以阻止O 抗原与相应抗血清的凝集反应[3]。根据生化反应和O抗原结构的不同，志贺氏菌可以分为痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌和宋内氏志贺氏菌。在发展中国家，由福氏志贺氏菌引起的感染性腹泻疾病高居首位。 随着生物实验技术的发展，志贺氏菌的检测和鉴定技术也在不断的完善，大致可分为三大类：常规生化鉴定方法、免疫学方法以及分子生物学方法。其中最为常用的是分子生物学上的常规PCR检测。 常规生化鉴定方法 常规生化检测须经过增殖培养、分离纯化、生化试验、血清学实验等，检验步骤繁琐、耗时长、准确性低，且一次检测完成样品项数较少[5]，不能应对市场需求的快速准确检验方法的要求。但这种方法具有直观、准确、稳定性好且假阳性率低等特点，因此一直被沿用至今。国家标准方法[6]中采用常规生化鉴定方法对志贺氏菌进行检测，整个过程需要4～5d。通过对SS 培养基、Mac 培养基、HE 培养基和MT 培养基进行比较，发现SS 培养基对志贺氏菌的检出率最高。为防止漏检其他菌型，可同时采用Mac 培养基来提高检出率。 免疫学方法 免疫学的发展为致病菌的快速检测提供了新方法，同时大大提高了致病菌检测的灵敏性和特异性。除了凝集实验、沉淀实验和补体实验等经典的免疫学检测方法，以免疫学方法为基础建立起来的检测技术也已被应用于志贺氏菌的检测。 酶联免疫技术 酶联免疫技术 (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) 是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合的一种敏感性很高的实验技术。建立间接 ELISA 方法以检测检测志贺菌纯培养液，其检出限为105～106CFU/ml；建立双抗夹心 ELISA 方法检测含0.1～1CFU/ml 志贺氏菌的样品在增菌13h 后可检出阳性反应，含1～10CFU/ml志贺氏菌的样品在增菌11h 后可检出阳性；用间接 Dot-ELISA 方法检测志贺氏菌的检出限可达106CFU/ml。E L ISA 法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点，适用于志贺氏菌的快速检测，但ELISA 方法影响因素多，假阳性率高且不易确定，还需要其他方法辅助检测。 SPA协同凝集法 金黄色葡萄球菌A 蛋白(Staphylococcal protein A，SPA)是某些金黄色葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白，具有同人和多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合的能力。SPA 协同凝集法是用已知标准血清吸附到含A 蛋白的金黄色葡萄球菌表面，使之成为吸附抗体的载体，再以此去诊断相应未知抗原产生的肉眼可见的凝集颗粒。用含A 蛋白丰富的金黄色葡萄球菌菌体与志贺氏菌抗血清在一定条件下混合致敏，让抗体结合到金黄色葡萄球菌细胞壁的A 蛋白上制成SPA 诊断试剂，样品经增菌后即可用SPA 诊断试剂来检验。SPA 协同凝集法在 24～48h 内即可得到检测结果，且检出率高，可作为一种快速灵敏的检验方法。由于SPA 能结合大量抗体，大大提高了灵敏性，缩短了检验周期。 分子生物学方法 以分子生物学为基础建立的众多检测技术以其敏感、快速、高特异等特点成为生物技术革命的新产物,已经应用于食源性致病菌的检测。检测志贺氏菌的分子生