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洗发水诱发蚕豆根尖细胞微核实验研究 Experimental study on Micronucleus of root tip cells of Vicia faba induced by?shampoo ? 姓名:樊婧婧??同组者：郭立????指导教师：郝雪峰 （太原师范学院??生物系111班??学号?2011131139） ? 摘 要 ?运用蚕豆根尖细胞微核技术，以微核千分率和污染指数作为指标，研究洗发水的水溶液对蚕豆根尖细胞的影响。洗发水水溶液对蚕豆根尖进行污染处理后，通过观察微核的形态，记录微核的数目，测定蚕豆根尖细胞的微核率，并且在实验中以未经污染处理的蚕豆根尖作为对照，来比较测定该洗发水的毒性，用蚕豆根尖微核技术对其污染效应进行监测和评价既简便又比较可靠。 Abstract: using the micronucleus technique, the micronucleus permillage and pollution index as the index, effect of water solution of shampoo on Vicia faba root tip cells. Shampoo water solution for pollution treatment on Vicia faba root tip, through the observation of micronucleus form, record the number of micronuclei, micronucleus test of Vicia faba root tip cell rate, and in the experiment without pollution treatment of Vicia faba root tip as control group, to compare the toxicity determination of shampoo, with VAMCN of its pollution effect monitoring and evaluation is a simple and reliable.? 关键词 ?蚕豆 微核实验?洗发水?核变异 ? 引 言? 微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，是间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3—1/20，染色与主核一样或稍浅。一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于日常洗漱用品的安全监测。 ? 1实验材料与用品 ? 1.1?实验材料 蚕豆种子 1.2?实验器材和试剂 显微镜、试管、蚕豆培养盆、纱布、毛巾、三角瓶、载玻片、盖玻片、溶有洗衣粉的水、卡诺氏固定液（用乙醇和冰醋酸以3:1混合配制）、盐酸（1mol/L）;Giemsa染液、洗发水。 ? 2实验方法与步骤 ? 2.1?浸种 按实验需要选取大小均匀、饱满的蚕豆种子20粒，直接放入盛水的塑料盆中，在常温下浸泡1天，期间要注意换水。 2.2?催芽 待种子吸胀后，用潮湿的纱布松散包裹置于盆中，纱布上载盖一层湿水的毛巾，催芽约1—2天。 2.3?被测液处理根尖 选取初生根生长良好的种子，放入盛有被测液的纱布中，进行根尖处理。另一些继续清水培养（作为对照组）。 2.4?根尖细胞恢复培养 处理后的种子用自来水浸洗，洗净后再置入潮湿纱布中，再恢复培养一天左右。 2.5?取材与制片 2.5.1固定 借助于物理方法或化学药剂的作用，迅速透入组织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态，同时更易于染色，可以更清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺氏固定液固定。 2.5.2水解分离 水解分离的作用是去除细胞内未固定的蛋白质,?同时使胞间层的果胶类物质解体，细胞分散而易于观察。用镊子取固定好的蚕豆根尖，放在试管内，加水解分离液，室温下处理8—20min，幼根软化即可。 2.5.3染色与压片 吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟。然后滴加染液，染色20～30分钟，染色完后,截下1～2mm左右长的根尖，加盖玻片，压片观察。 2.6?镜检 低倍镜（×10）镜检后，选择细胞分散均匀