DNA的溶液配制方法.docVIP

1.0.5mol/LEDTA 配制组分浓度： 0.5mol/l EDTA， PH=8配制量：500ml配制方法(1)称取93.06克EDTA.Na2.2H2O，置于500 ml烧杯中? ? (2)加入约400ml dd H2O.用热磁力搅拌器充分搅拌? ? (3)用NaOH调节PH值到8，约用10克固体NaOH? ? (4)在溶液冷却后，再用NaOH调节至PH=8? ? (5)加dd H2O将溶液定容到500 ml? ? (6)高温高压灭菌后，室温保存2.NaOH溶液的配制组分浓度：5 mol/l NaOH配制量：100 ml配制方法(1)称取固体NaOH20克于容器中(2)加入dd H2O定容到100 ml3.100 mmol/l Tris-HCl的配制组分浓度： mmol/l Tris-HCl， PH=6.4配制量：250 ml配制方法(1)称取3.025克Tris于250 ml烧杯中.??(2)加入约200ml dd H2O充分搅拌溶解.??(3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3 ml??(4)将溶液定容至250ml??(5)用棕色瓶分装于4度冰箱中??(6)如使用，用水浴加热溶解.4.氯仿-异戊醇的配制：配制方法(1)简单的体积混合，既要求比例为24：1即可? ? (2)储存于棕色玻璃瓶子中? ? (3)置于4度冰箱以便日后使用5.去污剂：CTAB：可将细胞膜裂解，使DNA释放到提取液中，同时也使组织匀浆中的蛋白质变性.EDTA：能与DNase的辅助因子Mg2+结合，使DNase失去活性，不能降解从细胞中释放的DNA.6.还原剂巯基乙醇：它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐.7.氯仿—异戊醇：它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去，将DNA与细胞中的蛋白质、碳水化合物等分开除去.8.RNase：它可去除核酸中的RNA，只留下DNA.9.硅珠悬浮液的配制（1） 称取1.2g硅珠粉，溶解于10ml无菌水中.（2） 放入4℃冰箱备用.（3） 使用时先涡旋使其混合均匀10.? ? ? ? 10×TE，500ml配制如下：将100mM Tris-Hcl（PH=8.0）6.057g与10mM EDTA（PH=8.0）1.8612g溶于400ddH2O中，调PH=8.0，定容到500ml。11.? ? ? ? 1×TE Buffer组成浓度：10mM Tris-HCl? ?1mM EDTA PH=8.0配制量：500ml配制方法：量取下列溶液于500ml烧杯中? ?? ?1M Tris-HCl? ?Buffer PH=8.0? ?5ml? ?? ?0.5M EDTA? ?? ? PH=8.0? ?1ml? ?? ?向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存.12.? ? ? ? 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGEPAGE操作流程及注意事项：1、涂胶1）将有耳玻片（耳朝下）泡于反硅化剂中，新液25分钟，旧液30分钟.2）涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴，轻而匀的沿一个方向涂三次，静10分钟.3）到时间取出.打开通风橱风干30分钟.2、封胶1）将两玻片对贴于橡胶框中，放平，用力拧死，夹住橡胶管.2） 溶废琼脂胶，分两次：第一次50秒，第二次10-20秒，防止沸出.3） 用小细长枪头通透加胶枪头，便于加样通畅，少起气泡.4） 吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴，将两面玻片充分封死，防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳，静止凝胶15分钟.（有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片，利于胶流下）3、灌胶1) 用长细枪头透开加胶枪头2) 从中间加入，每次不要全部打完，留一点在枪头内.防止断流而导致胶中含有气泡.3) 插梳子时两端平整，梳子紧贴玻板，梳齿头部不可有气泡.4) 拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透，然后平行用力拔出.5) 在插梳子15分钟内跟踪观察，适当下按，保证孔的深度.6) 等待2小时，以便胶充分凝固.4、吹孔1） 向中间槽加入1倍粗制TBE，要淹没过内玻片约1厘米.2） 拔梳子，小心平稳，均匀平衡.3）调1000p枪到300-600ul，进行吹孔，将小孔内沉淀物吹打干净，加样中再视时吹5、加样1） 用细长专用枪加入DNA 0.5ul.2） 一手托另一臂的肘，以保证加样手不抖.3） 一定垂直加到孔中去，不脱尾，不吸水，不靠壁，干净利落.4） 加完一次.在放于桌旁的吸纸上，将细枪头上余液吸干.5） 首、中、尾各留1到2个孔，两面胶孔的Marker不完全一样，以便区分.6） 加Marker 0.15ul 一般取0.