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NSP酶对植酸酶降解植酸效率影响的报告 摘要 本试验旨在研究NSP酶对植酸酶降解植酸效率的影响。试验以肉鸡常用豆粕为研究材料，设6个处理，试验I为对照组，不添加任何酶制剂，试验II组添加0.5FTU/g植酸酶，试验III、IV、V、VI组分别在试验II日粮基础上添加纤维素酶20U、果胶酶20U、木聚糖酶20U、复合酶(7U纤维素酶+7U果胶酶+7U木聚糖酶)，比较不同处理植酸磷的释放量。结果表明：与不添加任何酶比较，添加植酸酶、植酸酶+纤维素酶、植酸酶＋果胶酶、植酸酶＋木聚糖酶、植酸酶＋纤维素复合酶对豆粕中植酸磷的降解率分别提高了36.98%、37.06%、37.67%、38.20%和38.28%。与仅添加植酸酶比较，植酸酶+纤维素酶、植酸酶＋果胶酶、植酸酶＋木聚糖酶、植酸酶＋纤维素复合酶对豆粕中植酸磷的降解率分别提高了0.10%、0.87%、1.55%、1.64%。此结果说明，NSP酶能够提高植酸酶降解植酸的效率。 关键词 NSP酶 植酸酶 植酸降解率 饲料原料中植酸和非淀粉多糖(NSP)的存在，大大降 低了养分的消化率，进而影响畜禽的生产性能。大多数 植物籽实及谷物中60%~80%的磷以植酸磷的形式存在 (NRC，1994)，动物很难将这部分磷降解，添加植酸酶能 提高饲料磷的利用率，降低饲料添加无机磷的成本，减 少磷的排出量。NSP酶具有降解植物细胞壁结构，促进营 养物质释放，降低食糜黏度，提高内源消化酶活性，降 低畜禽肠道发病率等作用 [1] 。目前，关于酶制剂在畜禽生 产中的应用研究，主要集中在对植酸酶或NSP酶的单独添 加，有关2种酶同时添加的研究报道较少。本试验以常用 的蛋白质饲料——豆粕为研究材料，研究NSP酶(纤维素 酶、果胶酶、木聚糖酶及纤维素复合酶)对植酸酶降解植 酸效率的影响。 1 材料与方法 1.1 试验材料、试剂及仪器 植酸酶：山东农业大学承 担的国家自然科学基金项目：“利用定点突变技术研究二 硫键等对植酸酶结构、催化活性及热稳定性的作用”的攻 关成果，本课题组已经实验证明，这种植酸酶发酵液活 力达242FTU/ml，表达植酸酶的比活力为503FTU/mg蛋 白。纤维素酶：10万U/g；果胶酶：5万U/g；木聚糖酶： 20万U/g；纤维素复合酶：由纤维素酶、果胶酶、木聚糖 酶组成。均由华芬饲料酶有限公司提供。 醋酸-醋酸钠缓冲液，2M植酸钠溶液，10%钼酸铵， 硫酸亚铁-钼酸铵显色液，10% TCA。 Ultrospec 4300 pro UV-Visible 分光光度计；D-37529 Osterode高速冷冻离心机。 1.2 试验分组 以豆粕为试验材料，对照组不添加任何 酶制剂，试验II组添加0.5FTU/g植酸酶，试验III、IV、 V、VI组在添加0.50FTU/g植酸酶基础上分别添加纤维素 酶20U、果胶酶20U、木聚糖酶20U、复合酶(7U纤维素酶 +7U果胶酶+7U木聚糖酶)。 1.3 指标测定及分析 （1）豆粕植酸含量的测定。本试 验豆粕中植酸含量的变化是通过测定植酸释放出来的磷 含量的变化来表示。取1.5g可通过60目筛的豆粕，在碘量 瓶中用15ml 0.1 M HAc-NaAc缓冲液(pH5.5)混合。每克豆 粕添加酶水平分别是0FTU，0.5FTU植酸酶，0.5FTU植酸 酶+20U纤维素酶，0.5FTU植酸酶+20U果胶酶，0.5FTU植 酸酶+20U木聚糖酶，0.5FTU植酸酶+复合酶。混合液在 37℃培养3h，并且以200rpm/min晃动，再把样品立即放入 冰中终止反应。样品在4℃，800×g离心15min。取上清 1ml加4ml 12.5%TCA放置15min，然后在4℃，350×g离心 15min。取上清1000μl加显色剂1000μl在37℃培养5min， 在660nm波长处比色。以不添加植酸酶的对照组作为空白 进行比色。（2）定磷标准曲线的绘制。0.1M KH 2 PO 4 母 基金项目：利用定点突变技术研究二硫键等对植酸酶结构、催化活性及热稳定性的作用，编号*通讯作者山东畜牧兽医 2011 年第 32 卷 8 液：准确称取1.36gKH 2 PO 4 ，加水溶解，在容量瓶中定 容 至 100ml ， 备 用 ； 1000nmol/ml KH 2 PO 4 ： 将 0.1M KH 2 PO 4 母液稀释100倍。 按下表配置成含有不同磷浓度的溶液(总体积 1000μl)： 1000nmol/ml KH 2 PO 4 母液体积(μl) 0 100 200 300 400 500 0.1M HAc-NaAc缓冲液 (pH 5.5)体积(μl) 1000 900 800 700 600 500 最终磷浓度(nmol/ml) 0 100 200 300