微生物育种学　全套讲义.doc

微生物育种学 第一章 绪论 主要内容： 工业微生物育种在发酵工业中的地位；工业微生物育种的进展；工业微生物育种的方法 第一节 工业微生物育种在发酵工业中的地位 现代发酵工业迅猛发展的原因： 发酵工艺改进和发酵设备更新； 进行菌种的选育及其改良，为发酵工艺提供了人类需要的各种类型的突变菌株 使抗生素、酶制剂、氨基酸、有机酸、维生素、核苷酸、激素、生物碱、不饱和脂肪酸以及其他生物活性物质等产品的产量成倍甚至成千倍地增长，同时产品的质量也不断提高。 工业微生物育种的重要意义: 1、提高发酵工业产品的产量和质量 2、开发利用微生物资源，增加发酵工业产品的品种 工业微生物菌种的筛选 理想的工业发酵菌种（是工业微生物技术的关键和基础）必须具有下述特性: 1.纯培养物;2.遗传性状稳定;3.生长速度快;4.能利用廉价、来源广、成分简单的培养基；5.忍耐不良环境能力强;6.快速生产目的产物. 微生物菌种的获得 微生物的自然分布 土壤中的大量微生物已成为分离各种抗生素、生理活性物质、酶和氨基酸产生菌的主要来源。 微生物菌种获得的途径 菌种的来源 工业微生物的直接来源 向菌种保藏机构索取有关的菌株 微生物菌种分离筛选过程 （一）微生物样品的采集： 1.土壤采样:土壤有机质含量和通气状况;土壤的纵剖面;土壤pH;表面的植被;地理条件;季节条件. 2.根据微生物生理特点采样 微生物的营养需求和代谢类型与其生长的环境有很大相关性; 具有特殊性质的微生物的筛选; 海洋微生物能够产生不同于陆地来源的特殊代谢物. (二)富集培养 概念: 控制因素: （三）分离纯化： 1.好氧微生物的分离纯化 常规的分离方法 平皿反应快速检出法:透明圈法;变色圈法;生长圈法;抑菌圈法 2. 厌氧微生物的分离纯化 (四)菌种筛选、性能评价及菌种的初步鉴定 第二节 工业微生物育种的进展 工业微生物育种，无论从自然变异中选择或是人工诱变的选择，都是建立在遗传和变异的基础上。 遗传和变异是生物界生命活动的基本属性之一。 没有变异，生物界就失去进化的素材； 没有遗传，变异也无法积累。 同样，对于优良菌株的选育， 没有变异，就没有选择的素材； 没有遗传，选到的优良性状，也不能进行培育。 工业微生物育种学是建立在微生物遗传学基础上，两者相辅相成。 微生物本身，在漫长的进化过程中，达到适合于它的生存和繁衍的水平。野生型微生物经自然选择，能适应它的周围环境，能适应同其他物种的竞争，但却不能按人的意志生产人们需要的物质。 因此，从人类的利益出发，须对工业微生物菌种进行改良，使之产生数量远远超出微生物本身需要的物质，或者不是它正常产生的新物质。 对工业微生物菌种进行有目的的改良，是在有关微生物遗传学知识被人们了解并掌握之后才成为可能的。同时，这种改良涉及多学科领域。 诱变育种技术的诞生与发展 微生物遗传学诞生；诱发突变技术；抗生素和氨基酸等工业发展需要 自然选育 人工诱变选育 如:抗生素生产，特异青霉表层培养只有1—2U/ml 分离出产黄青霉同时伴以沉没培养成功，达到20U/ml 经过四十多年的诱变育种，到目前已达60 000U/ml以上 （比原始菌株的产量提高了上千倍。） 其他抗生素品种如链霉素、土霉素、四环素、红霉素及灰黄霉素等，都由原来的几十单位提高到目前的几万单位。 1981年，吴松刚教授从我国土壤中分离出灰黄霉素野生型菌株4541，经耐前体抗性选育，获得D-756变株。短短6年，发酵单位提高60倍以上，跃居世界领先水平。都由原来的几十单位提高到目前的几万单位。 又如，代谢控制育种（活力在于以诱变育种为基础，获得各种解除或绕过了微生物正常代谢途径的突变株）以20世纪50年代末谷氨酸发酵取得成功使发酵工业进入第三转折期——代谢控制发酵时期，并在其后的年代里得到飞跃的发展。 从而人为地使有用产物选择性地大量生成积累，并且在有控制的条件下培养，大量地生产这种有用产物 重组育种技术的诞生与发展 菌株长期使用诱变剂处理之后 除产生诱变剂“疲劳效应”外，还会引起菌种生长周期的延长、代谢减慢等，这对发酵工艺的控制是不利的。 杂交育种可以作为育种的另一手段，其成功不仅表现在种内杂交上，而且在种间杂交以至属间杂交都取得令人满意的结果。 杂交的目的： 把不同菌株的优良经济性状集中于重组体中，克服长期用诱变剂处理造成的上述缺陷，同时杂交还是增加产品新品种的手段之一。 从发酵工业微生物育种史，可以看到经典的诱变育种是最主要的育种手段，也是最基础的育种手段，但是它具有一定的盲目性。代谢控制育种的崛起标志着发展到理性阶段，导致了氨基酸、核苷酸及某些次级代谢产物的高产菌株大批地投入生产。 代谢控制育种