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牛血清在细胞培养中的作用及产生的常见问题 来源： 点击数： 录入时间：08-07-22 11:39:00 现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以 CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量是关键，而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的，所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性。 一、牛血清的主要成分 牛血清是一种成分复杂的混合物，其大部分成分已为人所知，但还有一部分仍不清楚，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。牛血清主要成分有以下几类： 1 、蛋白质类 包括白蛋白、球蛋白、α -巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用）、胎球蛋白（促进细胞附着）、 转铁蛋白（能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用）、纤维粘连素（促进细胞附着生长）等； 2 、多肽类 主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用； 3 、激素类 激素对细胞的作用是多方面的。包括： 胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关； 类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用： 促生长激素：促进细胞增殖的效应； 氢化可的松：血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明，血清 中的氢化可的松，在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。 4 、其他成分 如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培养基中这些成分的作用并不明显，与蛋白相结合的微量元素对细胞生长起促进作用。 二、牛血清在细胞培养基中的主要功能 牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。 1 、提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质； 2 、提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用； 3 、是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源； 4 、起酸碱度缓冲液作用； 5 、提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 三、牛血清的分类 根据牛出生时间和血清采制分离方法分为： 1 、胎牛血清：八月龄胎牛心脏穿刺取血； 2 、新生牛血清：出生 12-24小时新生牛静脉采血； 高级新生牛血清：采血后静置自然析出的血清； 标准新生牛血清：经离心分离的血清； 普通新生牛血清：融血或微融血的血清； 3 、小牛血清：出生三月龄小牛动脉采血分离血清； 四、牛血清的质量要求 （一） WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求 : 1. 牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家，并应具备适当的监测系统。 2. 有些国家还要求牛血清来自没有用过反刍动物蛋白饲料喂养的牛群。 3.要能证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。 4.血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。 5.无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无大肠杆菌噬菌体污染。 6.要求血清对细胞有良好的支持繁殖作用。 （二）我国在对牛血清的质量标准最早在 2000年版《中国生物制品主要原辅材料质控标准》中提出。包括物理性状、总蛋白，血红蛋白、细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。 2005版药典颁布之后，小牛血清质量标准被纳入《中国药典》 2005年版 第三部生物制品分册。 （三）美国对牛血清的质量要求： Gibco 和 hyclone等美国主要血清供应商的牛血清都已进入到我国市场，他们对血清质量标准有严格要求，从血清来源到产品质量都有明确规定。 1 、血清来源 ：可从世界各地收集胎牛血清，但必须符合其质量标准和美国农业部进口要求。 2 、血清的收集：必须符合工业生产的标准，低温采集，一次分离，分离后立即混合冻存。 3 、血清的制备：超低 IgG胎牛血清、透析血清、 γ - 射线辐照； 4 、除菌过滤： 0.22 μ m 和 0.1 μ m 滤膜过滤； 5 、成品分装：根据需要分