微小隐孢子虫免疫保护性基因的研究进展_医学论文.docVIP

微小隐孢子虫免疫保护性基因的研究进展_医学论文 微小隐孢子虫免疫保护性基因的研究进展_医学论文 【关键词】 微小隐孢子虫；免疫保护；基因 隐孢子虫（Cryptosporidium）是属于原生动物界的营寄生生活的单细胞原虫。迄今报道过的隐孢子虫虫种有：微小隐孢子虫（C.parvum）,小鼠隐孢子虫（C.muris）, 火鸡隐孢子虫（C.meleagridis）,蛇隐孢子虫（C.serpentis）,鱼隐孢子虫（C.nasorum）等，对人和大多数脊椎动物造成感染的主要是Tyzzer于1912［1］年发现的微小隐孢子虫（C.p.）。微小隐孢子虫是一种重要的呈世界性分布的机会性致病原虫,可引起人畜共患的隐孢子虫病(cryptosporidiosis)。免疫力正常的人感染此虫后,虽可引起急性腹泻,但常为自限性；免疫力低下、功能缺陷或免疫抑制的患者感染此虫后,则可引起严重胃肠炎并伴有水样腹泻,导致大量体液丢失而危及生命。该病已被确定为引起人类腹泻的六大病因之一,并且隐孢子虫在艾滋病患者中的感染率高达48%，长期的严重腹泻，是艾滋病病人的重要致死因素之一［2］。世界范围内曾因水源的污染而造成多起隐孢子虫病的暴发流行［3］，对人类公共卫生造成很大威胁。 自从发现隐孢子虫以来，许多研究者一直致力于该病的防治研究，但目前对该病尚无有效的防治措施，因此研究对该病的早期诊断、治疗以及预防的疫苗就显得尤为重要。隐孢子虫生活史复杂,各期均有与致病和免疫有关的抗原蛋白，寻找有效的保护性抗原成分及其基因是微小隐孢子虫疫苗研究的基础。研究者在其基因功能方面已作了大量的研究，目前提交到GenBank的DNA序列已有4 000多个。对编码隐孢子虫蛋白基因的研究发现，可能作为微小隐孢子虫疫苗的基因可分为7类：细胞骨架成分(cytoskeletal components)、核蛋白(nuclear proteins)、酶(enzymes)、RNA翻译因子(translation factors)、热休克蛋白(heat shock proteins)、卵囊壁成分(oocysts wall component)和表面抗原与微线抗原(surface antigen and micronemal protein)［4］。在上述基因中编码子孢子表面抗原(如cp23、cp15、cp15/60等)的基因被公认为疫苗的候选基因。该文就当前研究者筛选的可能有免疫保护性的基因片段的研究进展作一综述。 1 cp23基因的研究进展 对cp23基因最初报道是1996年，Perryman等［5］从微小隐孢子虫的cDNA文库中克隆出一个编码23 kD糖蛋白(子孢子表面蛋白cp23)的基因序列（GenBank编号U34390），其开放读码框架为333 bp，编码111个氨基酸，预计氨基酸序列含有一个N糖基化位点，但缺少螺旋疏水区域，抗原决定簇分析揭示抗cp23的单克隆抗体C6B6和7D10分别识别其不同的表位,前者识别六聚物谷氨酰胺天冬氨酸赖氨酸脯氨酸丙氨酸天冬氨酸(QDKPAD)的线性表位，它在cp23 C末端的27个氨基酸残基中出现两次；后者识别由该27个氨基酸残基共同构成的构象表位。经Western blotting分析表明cp23蛋白和阳性血清中的IgG1和IgA反应强烈，通过单克隆抗体C6B6检测，cp23蛋白定位于子孢子表面,它是诱导保护性免疫力的主要成分，是最佳的核酸疫苗候选抗原。已发现抗该蛋白的单克隆抗体可以明显抑制感染，重组的cp23蛋白亦可诱导产生保护性抗体。Priest等［6］根据Perryman等报道的序列设计了引物，扩增了该片段，用定向克隆法构建在pGEX4T2表达载体中，转化到E.coli HB101，进行了表达，得到了43 kD的融合蛋白，并用此蛋白进行了ELISA分析。结果发现，重组cp23抗原ELISA与灵敏度高的免疫印迹法有很好的一致性，灵敏度和特异度分别为90%和92%，以免疫印迹法作为“金标准”，重组cp23抗原ELISA比普遍采用的粗卵囊抗原ELISA法敏感性更高，这种方法在将来的流行病学研究中更为有用。Eisenberg等［7］选择33名男性艾滋病患者，以其中确诊为隐孢子虫病的11人为实验组，另22人（分为两组）为对照组，分别用重组的cp23蛋白和从卵囊分离纯化的TX17为抗原对他们做ELISA检测，结果显示，用cp23抗原时，隐孢子虫病后的血清样本中的IgG中位数值及诊断前后IgG的净增长值，在实验组（1 334 U）与对照组（329 U）有明显差异；而用TX17抗原时，两组IgG中位数值无明显差异，但IgG净增长值有明显差异。该结果表明，cp23是一种重要抗原，可用于HIV感染者的隐孢子虫病流行病学和自然病程的研究。1999