阿霉素纳米制剂克服肿瘤多药耐药作用与研究.pdfVIP

浙江大学博士论文 阿霉素纳米制剂克服肿瘤多药耐药作用的研究 论文题目：阿霉素纳米制剂 克服肿瘤多药耐药作用的研究 作者：许东航 导师：梁文权 摘 要 肿瘤细胞对抗肿瘤药物产生多药耐药性(mulfidrug 瘤化疗失败的重要原因，也是化疗介入肿瘤治疗以来一直悬而未决的重要问题。 克服MDR的策略主要包括化疗增敏剂如维拉帕米等的开发，肿瘤药物进行结构改 造，生物技术相关的逆转方法如基因治疗等，这些策略均存在一定不足。药物载 体作为一种新型的MDR逆转策略，既可提高化疗药物作用的敏感性，又可不增加 化疗药物对正常组织的毒副作用，还可突破抗肿瘤药物的剂量限制，可有效克服 上述克服MDR策略的不足而受到较大关注． 米粒、阿霉素非离子型表面活性剂囊泡等三种纳米制剂，并分别用非离子型表面 活性剂、阳离子材料等修饰脂质体、固体脂质纳米粒，同时将脂质体和维拉帕米 联合应用，对阿霉素的细胞积聚及其胞内动力学特征，细胞摄取、外排机制和克 服肿瘤细胞多药耐药作用的可能机制进行了探讨，同时研究了PluronicP85修饰 阿霉素脂质体的小鼠药代药动学和药效学以及阿霉素非离子型表面活性剂囊泡的 小鼠药效学。 论文首先建立了耐药细胞模型和分析测定方法。结果显示K562／DOx细胞P—gp 高表达，对阿霉素耐药指数达107．50，而维拉帕米(Ver)可部分逆转耐药性。 K562／DOX细胞可以作为以阿霉素为模型药的纳米制剂克服肿瘤细胞耐药作用及机 范围内呈良好线性关系，相关系数为0．9998；该方法日内，日间精密度、回收率 Ⅵ 浙江大学博士论文 阿霉素纳米制剂克服肿瘤多药耐药作用的研究 符合测定要求。并通过在测定过程添加0．1％十二烷基硫酸钠孵育30min，有效地解 决了阿霉素测定过程的荧光淬灭。 脂质体可部分克服肿瘤多药耐药作用。首先采用硫酸铵梯度法制备了阿霉素 脂质体，药物稳定，渗漏少。K562／DOX细胞摄取结果显示，阿霉素脂质体(DOX．L) 较同浓度的溶液(DOX．I)有更多被耐药细胞摄取。而耐药细胞外排阿霉素脂质体 较溶液缓慢，说明阿霉素脂质体具有延缓药物外排的作用。药物敏感试验(MTT) 检测脂质体的耐药指数降低为3．30，说明阿霉素脂质体可部分克服多药耐药。低 温和内吞抑制剂(叠氮钠、甘露醇和氯喹)均显著降低K562／DOX细胞内DOX的积 聚，说明耐药细胞摄取脂质体是通过能量依赖性的内吞方式。 为了进一步了解DOX的细胞动力学及其DOX在亚细胞器的分布，我们采用HPLC 建立了细胞内亚细胞器(细胞核)的含量测定方法。DOX．L和DOX-I在亚细胞器 的分布结果显示，与对照DOX．I相比，相同药物量的DOX．L与细胞孵育后，能 显著提高细胞核内药物量。而且脂质体减慢消除速率，延长细胞内药物滞留时间， 改变药物在细胞内的动力学特征和分布，提高了细胞核内药物量；说明阿霉素脂 质体有趋核分布的特点． 非离子型表面活性剂修饰脂质体后，将对细胞摄取、外排行为和克服多药耐 EL 修饰脂质体，包封率均达到90％以上，粒径与阿霉素脂质体相似。脂质体渗漏结果 显示，随着非离子型表面活性剂HLB值的降低，渗漏加快。对于同系列的非离子 型表面活性剂，2h时K562／DOX摄取药物量随非离子型表面活性剂的HLB值降低， 摄取增加．但对不同系列的表面活性剂修饰的脂质体，摄取量除与HLB值相关外， 还可能与表面活性剂的性质相关。MTT检测结果显示修饰后的细胞毒作用增加，随 HLB值降低，细胞毒作用增加，证实了非离子型表面活性剂修饰的阿霉素脂质体可 更有效克服多药耐药。 阳离子脂质体可促进阿霉素趋核，但可能降低耐药细胞摄取药物量。采用 DC-Chol和CTAB制备了阳离子脂质体，发现进入细胞的药物量较普通脂质体有所 下降，但细胞核的药物量却和脂质体相当，细胞核百分比高于普通脂质体。 VII 浙江大学博士论文