酶工程 教学课件 作者 梁传伟张苏勤 主编 胡本高 主审 第六章.ppt

尚辅网 尚辅网 酶工程 第六章 酶与细胞固定化 第一节 酶固定化 随着酶学研究的不断深入和酶工程的发展，工业化生产的酶越来越多，酶的应用越来越广泛。现在酶在食品、轻工、医药、化工、分析检测、环境保护和科学研究等方面的应用均已取得了显著的成效。然而在使用酶的过程中，人们也注意到酶的一些不足之处。例如： (1) 酶的稳定性较差，在温度、pH值和无机离子等外界因素的影响下，容易变性失活。 (2) 酶一般都是在水溶液中与底物反应，这样酶在反应系统中，与底物和产物混在一起，反应结束后，即使酶仍有较高的活力，也难于回收利用。这种一次性使用酶的方式，不仅使成本较高，而且难于连续化生产。 第一节 酶固定化 (3) 酶反应后成为杂质与产物混在一起，无疑给进一步的分离纯化带来一定的困难。 为此，人们针对酶的不足寻求其改善方法。其办法之一就是固定化技术的应用。 固定化酶的研究从上个世纪50年代开始，l953年德国的格鲁布霍费(Grubhofer)和施莱思(Schleith)采用聚氨基苯乙烯树脂为载体，经重氮化法活化后，分别与羧肽酶、淀粉酶、胃蛋白酶、核糖核酸酶等结合，而制成固定化酶。20世纪60年代后期，固定化技术迅速发展。 l969年，日本的干佃一郎首次在工业生产规模应用固定化氨基酰化酶从DL-氨基酸连续生产L—氨基酸，实现了酶应用史上的一大变革。此后，固定化技术迅速发展，促使酶工程作为一个独立的学科从发酵工程中脱颖而出。在1971年召开的第一次国际酶工程学术会议上，确定固定化酶的统一英文名称为Immobilized Enzyme。 第一节 酶固定化 固定化酶是指固定在载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶。固定化酶既保持了酶的催化特性，又克服了游离酶的不足之处，具有增加稳定性，可反复或连续使用以及易于和反应产物分开等显著优点。 用于固定化的酶，起初都是采用经提取组分和纯化后的酶。随着固定化技术的发展，也可采用含酶菌体或菌体碎片进行固定化，直接应用菌体或菌体碎片中的酶或酶系进行催化反应，这称之为固定化菌体或称固定化死细胞。1973年，日本首次在工业上成功地应用固定化大肠杆菌菌体中的天门冬氨酸酶，由反丁烯二酸连续生产L-天门冬氨酸。 第一节 酶固定化 固定化酶和固定化菌体都是以酶的应用为目的，它们的制备方法和应用方法也基本相同。 在固定化酶和固定化菌体的基础上，20世纪70年代后期出现了固定化细胞技术。固定化细胞是指固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的细胞。也称为固定化活细胞或固定化增殖细胞。1976年，法国首次用固定化枯草杆菌细胞生产啤酒和酒精。l978年，日本用固定化枯草杆菌细胞生产α-淀粉酶的研究成功，开始了用固定化细胞生产酶的先例。郭勇等人从l984年开始，在国内首次进行固定化细胞生产α-淀粉酶、糖化酶和果胶酶等的研究，取得良好效果。 第一节 酶固定化 1979年，固定化毛地黄细胞和长春花细胞的研究成功，推动了固定化植物细胞和动物细胞的研究，为动植物来源的天然产物的工业化生产开辟了新的途径。 1982年，日本首次研究用固定化原生质体生产谷氨酸，取得进展。说明细胞制备成固定化原生质体后，由于有载体的保护，稳定性较好，同时由于解除了细脑壁这一扩散障碍，更有利于胞内物质的分泌。1986年，郭勇等人首次用固定化原生质体生产细胞间质中存在的碱性磷酸酶，取得可喜成果，随后，又进行了固定化原生质体生产葡萄糖氧化酶和谷氨酸脱氢酶等的研究，为细胞内酶生产技术路线的变革提供了新的方法。 固定化细胞和固定化原生质体以酶等各种代谢产物的生产为目的，它们可以代替游离细胞进行酶的发酵生产，具有提高产酶率，缩短发酵周期并可连续发酵生产等优点。在酶的发酵生产中有广阔的发展前景。 第二节 酶和菌体固定化 将酶与水不溶性的载体结合，制备固定化酶的过程称为酶的固定化。 固定在载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶称为固定化酶。 固定化所采用的酶，可以是经提取分离后得到的有一定纯度的酶，也可以是结合在菌体(死细胞)或细胞碎片上的酶或酶系。固定在载体上的菌体或菌体碎片称为固定化菌体，它是固定化酶的一种形式。在固定化细胞(活细胞)出现之前，也有人将固定化菌体称为固定化细胞。 固定化酶和固定化菌体部是以酶的应用为目的，其制备方法和应用方法基本相同。 第二节 酶和菌体固定化 一、酶和菌体固定化的方法 酶和菌体固定化的方法很多。主要可分为吸附法、结合法、交联法和热处理