酶工程 教学课件 作者 梁传伟张苏勤 主编 胡本高 主审 第三章.ppt

尚辅网 尚辅网 酶 工 程 第三章 酶的发酵生产 第一节 酶生物合成的基本理论 第一节 酶生物合成的基本理论 第一节 酶生物合成的基本理论 二、蛋白质的生物合成——翻译 以mRNA为模板，以氨基酸为底物，在核糖体上通过各 种tRNA，酶和辅助因子的作用合成多肽链的过程，称为翻译。 翻译是将RNA分子上的碱基排列次序转变为多肽链上氨基酸的排列次序的过程。不同的生物，其翻译过程有些差别。现已大肠杆菌为例，说明翻译的基本过程。 翻译过程分为4个阶段。 1.氨基酸活化生成氨酰-tRNA 氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下，与特定的tRNA合，生成氨酰-tRNA。此过程由ATP提供能量，其反应如下： 第一节 酶生物合成的基本理论 aa+tRNA+ATP 氨酰-tRNA合成酶 aa-tRNA+AMP+PPi 对于大肠杆菌而言，肽链合成时的第一个氨基酸都是甲酰甲硫氨酸。它是在甲硫氨酸与tRNA结合后，再经甲酰化而成。即： Met+tRNA’ +ATP→Met-tRNA’ +AMP+PPi Met-tRNA’再经甲酰转移酶[EC2.1.2.9]的作用，甲酰化而生成甲酰甲硫氨酰-Trna’（fMet-tRNA’）。 2.肽链合成的起始 肽链合成的起始阶段是在GTP和起始因子(Initiation Factor)的参与下,核糖体30s亚基, fMet-tRNA’,mRNA和50s亚基结合，组成起始复合物的过程。这一阶段包括5个步骤： 第一节 酶生物合成的基本理论 （1）30s亚基与起始因子IF3结合； （2）30s亚基与mRNA结合，形成30s-IF3-mRNA复合物 （3）fMet-tRNA’与起始因子IF2以及GTP结合； （4）在起始因子IF1的参与下，fMet-tRNA’-IF2-GTP与 30s- IF3-mRNA结合生成30s起始复合物，在此30s起始复合物中，fMet-tRNA’正好位于mRNA的起始密码子AUG上； （5）50s亚基与上述30s起始复合物结合，形成具有完整结 构的70s核糖体。在此过程中，同时放出IF1，IF2，IF3，并使GTP水解生成GDP和Pi。在此70s核糖体形成时，fMet-tRNA’位于70s核糖体的“P”（肽酰基位），而它的“A”位（氨酰基位）是空位。 第一节 酶生物合成的基本理论 蛋白质合成的起始阶段的示意图如图3-2所示。 第一节 酶生物合成的基本理论 3．肽链的延伸 在延伸因子（Elongation Factor）的参与下，与mRNA上密码子对应的氨酰-tRNA进入70s核糖体之中的“A”位。通过肽链合成酶的作用，P位上fMet—tRNAF 的甲酰甲硫氨酰（fMet）与A位上的氨酰-tRNA(aa1-tRNA1)以肽键结合，形成肽酰-tRNA。接着，mRNA和核糖体作相对移动，A位上的肽酰-tRNA转至P位上，而原在P位上的t-RNAF游离出去。然后，根据mRNA上密码编排，下一个氨酰-tRNA进入A位，再重复上述过程，使肽链不断延伸，直至终止密码子为止。其主要过程如下: 第一节 酶生物合成的基本理论 （1）延伸因子EF-T与氨酰-tRNA(aa1-tRNA1)以及GTP结合；（2）aa1-tRNA1进入70s起始复合物的A位，同时放出EF-T，GDP和Pi;（3）肽合成酶催化P位上的fMet脱离 t-RNA’，而与A位上的aa1-tRNA1通过肽链结合，形成肽酰-tRNA(fMet-aa1-tRNA1)；（4）在延伸因子EF-G和GTP的参与下，mRNA与70s核糖体作相对移动，使原在A位上的fMet-aa1-tRNA1位移至P 位，A位成为空位，同时放出EF-G、GDP、Pi以及tRNAF。然后下一个氨酰-tRNA（aa2-tRNA2）进入A位，重复上述（3）?（4）步骤，如此往复，使肽链不断延伸（图3-3）。 第一节 酶生物合成的基本理论 第一节 酶生物合成的基本理论 4．肽链合成的终止 随着肽链的延伸，mRNA与70s核糖体不断地作相对移动。当mRNA分子中的终止密码子（UAA，UAG，UGA）移动到核糖体的A位时，没有相应的氨酰-tRNA进入，此时释放因子（Release Factor）进入A位，并与终止密码子结合。据研究表明，释放因子有两种，其中RF-1可与UAA和UAG结合，而RF-2可与UAA和UGA结合。在释放因子进入A位后，已合成的完整肽链从P位转至A位时，被释放出来。随之70s核糖体解离成为30s亚