酶工程 教学课件 作者 梁传伟张苏勤 主编 胡本高 主审 第五章.ppt

尚辅网 尚辅网 酶工程 第五章 酶分子修饰 第—节 金属离子置换修饰 通过改变酶分于中所含的金属离子，使酶的特性和功能发生改变的方法称为金属离子置换修饰。简称为离子置换法。 有些酶含有金属离子。而且金属离子往往是酶活性中心的组成部分，对酶的催化功能起重要作用。例如：α-淀粉酶的 ，谷氨酸脱氢酶的 ，过氧化氢酶中的 等等。 若从酶分子结构中除去其所含的金属离子，酶往往会失活，若重新加入原有的金属离子，酶可以恢复原有活性，若加进不同的金属离子，则可使酶呈现不同的特性。有的可使酶活性降低，甚至失活；有的却可使酶的活力提高并增加酶的稳定性。 第—节 金属离子置换修饰 用于酶分子修饰的金属离子，往往是二价金属离子。例如 等等。金属离子置换修饰法只适用于本来在结构中含有金属离子的酶。 在离子置换修饰的过程中，首先要加入一定量的乙二胺四乙酸(EDTA)等金属螯合物到酶液中，使酶分子中的金属离子与EDTA形成螯合物，此时酶成为无活性状态。通过透析或超滤、分于筛层析等方法，可将EDTA-金属螯合物从酶液中分离除去。然后用不同的金属离子加到酶液中，酶蛋白与金属离子结合。根据离子种类的不同，经离子置换后的酶将会出现不同的特性。有些修饰酶活性比原来酶的活性降低，甚至完全无活性；有些修饰酶的活性比原酶活性提高；有些修饰酶的稳定性比原酶增加等。所以只要选择到适宜的金属离子作修饰剂，去置换原来的金属离子，就有可能提高酶活力，增加酶稳定性。 第二节 大分子结合修饰 利用水溶性大分子与酶结合，使酶的空间结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性与功能的方法称为大分子结合修饰法。简称为大分子结合法。 通常使用的水溶性大分子修饰剂有：有旋糖酐、聚乙二醇、肝素、蔗糖聚合物(Ficoll)、聚氨基酸等。这些大分子在使用前一般需经过活化，然后在一定条件下与酶分子以共价键结合。对酶分子进行修饰。例如：右旋糖酐先经高碘酸(HIO4)活化，然后与酶分于的氨基共价结合。 第二节 大分子结合修饰 第二节 大分子结合修饰 由于酶的结构各不相同，所以不同的酶所结合的修饰剂的种类和数量也有所差别，修饰后酶的特性和功能的改变情况也不一样。必须通过试验确定最佳的修饰剂的种类和浓度。操作时需根据所要求的分子比例控制好酶和修饰剂的浓度，并控制好温度、pH值和反应时间等修饰条件，以便获得理想的修饰效果。 大分子结合修饰品是目前应用最广的酶分子修饰方法。经过此法修饰的酶可显著提高酶活力，增加稳定性或降低抗原性。 第二节 大分子结合修饰 一、通过修饰提高酶活力 酶的催化能力受诸多因素的影响。本质上是由其特定的空间结构，特别是由其活性中心的特定构象所决定的。 水溶性大分子通过共价键与酶分子结合后，可使酶的空间结构发生某些改变，使酶的活性中心更有利于和底物结合，并形成准确的催化部位，从而使酶活力得以提高。例如：每分子核糖核酸酶与6.5分子的右旋糖酐结合，可使该酶的活力提高到原有的活力的2.25倍；用右旋糖酐修饰胰凝乳蛋白酶，当每分子酶与11分子右旋糖酐结合时，修饰酶的活力达到原有的活力的5.1倍；每分子胰蛋白酶用11分子的右旋糖肝修饰后，酶活力可提高30％等。 第二节 大分子结合修饰 二、通过修饰增加酶的稳定性 各种酶在保存或使用一段时间以后，由于受到各种因素的影响，原来完整的空间结构将会逐渐受到破坏，致使酶活力逐步降低，最后完全丧失其催化功能。可见酶的稳定性较低是普遍存在、有待提高的问题。 酶的稳定性可用其半衰期来表示。酶的半衰期是指酶的活力降低到原来活力一半时所经过的时间。不同的酶有不同的半衰期。有的酶半衰期长，说明其稳定性好，而稳定性差的酶其半衰期则短。有些作为药物使用的酶，进入体内后由于受机体各种因素的影响，往往稳定性差，半衰期短。例如，对治疗血栓有显著疗效的尿激酶，在人体内半衰期只有2～20min；有多种疗效的超氧物歧化酶，在人体内半衰期仅为6min左右等等。为此，如何增加酶的稳定性，延长酶的有效作用时间，是酶工程的一大重要课题。 第二节 大分子结合修饰 为了使酶的稳定性增加，必须设法使酶的空间结构稳定，特别要使酶活性中心的构象得到保护。采用其他大分子与酶合，形成复合物，就可起到保护酶的天然构象的作用，从而增加酶的稳定性。 可以与酶结合的大分子很多。归纳起来，可