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慢病毒载体转基因羊的DNA甲基化研究
田永芝’,刘晨曦’,李文蓉,刘明军+
新疆动物生物技术重点开放实验室,乌鲁木齐830000
关键词:DNA甲基化;多基因共表达转基因羊;5-azaC:TSA
引言
DNA甲基化是一种基因组的表观遗传修饰,在基因调控中发挥着重要作用。早期对慢病毒载体转基因
饰。该研究不仅进一步证实了DNA甲基化是慢病毒转基因动物中转基因表达效率的重要调节因子,而且开
启了多基因共表达转基因动物的表观遗传研究。
材料方法
的拷贝数;其次,重亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测其DNA甲基化水平。
同上,制备了2A肽介导的三荧光报告基因共表达转基因羊LV-2A.TYG,并对转基因羔羊尾组织中荧
光蛋白基因的表达及DNA甲基化水平进行了检测。紧接着,分离了羔羊尾组织成纤维细胞,运用不同浓度
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DNA甲基转移酶抑制剂5.azaC(0、10、20、40、80M)和去乙酰化酶抑制剂TSA(0、10、20、40、
80nM)对其分别处理0、24、48、72h和96h。倒置荧光显微镜下观察,并进行流式细胞分析。
结果与讨论
eGFP在不同转基因羊个体及组织中差异表达:转基因拷贝数多为2.3个,但与eGFP表达水平无相关
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