生物制药工艺学 教学课件 作者 吴晓英 主编 郭勇 主审 第六章 核酸类药物.ppt

尚辅网 尚辅网 尚辅网 生产工艺---(2) 以葡萄糖酸钙为原料的合成路线 葡萄糖酸钙 D-葡萄糖 2-氨基-D-阿拉伯糖-恶唑啉 环胞苷 阿糖胞苷盐酸盐 [降解,氧化] H2O2,Fe3+ [环合] NH2CN,CH3OH,氨水 40-56 0C 51-62 0C,30min [环合Ⅱ] 丙炔腈 二乙基二酰胺 [水解,开环,成盐] 氨水,HCL-CH3OH溶液 PH4 尚辅网 （四）阿糖胞苷－作用与用途 阿糖胞苷进入体内转变为阿糖胞苷酸，抑制DNA聚合酶，阻止胞二磷转变为脱氧胞二磷，从而抑制DNA的合成，干扰DNA病毒繁殖和肿瘤细胞的增殖。 用于治疗急性粒细胞白血病，具有见效快，选择性高的特点，其他抗癌药合用疗效更好。由于易被胃肠道粘膜和肝中胞嘧啶核苷脱氨酶作用而失活，故口服无效，只能注射。 尚辅网 （五）聚肌胞苷酸 (PolyI:C） 是1967年美国人Field发现的人工合成的干扰素诱导物，具有抗病毒、抗肿瘤、增强淋巴细胞免疫功能和抑制核酸代谢等作用。 聚肌胞系由多聚肌苷酸和多聚胞苷酸组成的双股多聚核苷酸。Poly I在核糖上联接次黄嘌呤，PolyC在核糖上联接胞嘧啶，在一定的的条件下，按碱基配对的原理，两个单链碱基互补连接起来形成螺旋双链聚肌胞。 尚辅网 （五）聚肌胞苷酸 (聚肌胞,PolyI:C） 生产工艺： 1.底物5‘-核苷二磷酸吡啶盐的制备 5’-核苷酸(5’-肌苷酸或5’-胞苷酸)+吗啡林+双环己基羰二 亚胺 5’-核苷酸吗啡林盐+三正丁胺磷酸盐无 水吡啶 5’-核苷二磷酸吡啶盐(CDP吡啶盐,IDP吡啶盐) 乙醇,830C回流 尚辅网 （五）聚肌胞苷酸 (聚肌胞,PolyI:C） 2.固定化多核苷酸磷酸化酶的制备 （1）酶的制备:培养大肠杆菌1.683取得菌体 抽提液 收集0.35mol/L洗脱液中酶活最高部分. 破细胞 链霉素沉淀去核酸 硫酸铵分布盐析 DEAE-纤维素层析 尚辅网 （五）聚肌胞苷酸 (聚肌胞,PolyI:C） （2）固定化载体的制备 琼脂糖融化 固定化载体 （3）多核苷酸磷酸化酶的固定化 将分离纯化的酶液滴加入冰浴中的载体,得到共价结合的固定化多核苷酸磷酸化酶. 斯班-80 甲苯,四氯化碳 搅拌冷却后与环氧氯丙烷铰链制成珠状 对β-硫酸酯乙砜基苯胺 醚化 NaNO2+HCL重氮化 尚辅网 （五）聚肌胞苷酸 (聚肌胞,PolyI:C） 3.Poly I:C的制备 （1）底物预处理 CDP吡啶盐转成锂盐，IDP吡啶盐转成钠盐。 （2）酶促反应： 分别酶促反应制取Poly I、Poly C。然后等摩尔Poly I与Poly C混合，生成产品。 尚辅网 （五）聚肌胞苷酸 (聚肌胞,PolyI:C）－作用与用途 聚肌胞进入人体诱导产生干扰素，后者作用于正常细胞产生抗病毒蛋白（AVF），干扰病毒的繁殖，保护未受感染细胞免受感染。 临床已试用于肿瘤、血液病、病毒肝炎及痘类毒性感染等多种疾患,对带状疱疹有较好的疗效,对病毒性肝炎,病毒性角膜炎和扁平苔藓有明显疗效,对乙型脑炎,流行性腮腺炎,类风湿性关节炎等有疗效. 尚辅网 （六）胞二磷胆碱 1954年Kennedy博士等人发现了胞二磷胆碱，随后化学合成并确定了分子结构。1957年Rossiter研究发现，胞二磷胆碱与磷脂代谢十分密切，是卵磷脂生物合成的重要辅酶。1963年日本武田公司首次开发，用于治疗意识障碍获得成功，商品名Nicholin，译名尼可林。 尚辅网 （六）胞二磷胆碱 胞二磷胆碱的化学名称为胞嘧啶核苷--二磷酸胆碱，有氢型和钠型两种。结构式见下图： 尚辅网 （六）胞二磷胆碱－生产工艺 （一）酶合成法 胞二磷胆碱由微生物菌体（如啤酒酵母）所提供的酶系催化胞苷酸和磷酸胆碱而合成 反应体系为：磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（pH8.0）200mol/ml，CMP 20μmol/ml，磷酰胆碱 30 μmol/ml ，葡萄糖 100μmol/ml，MgSO4·7H2O 20μmol/ml，酵母泥 550mg/ml。于28℃保温20h，可得胞二磷胆碱，对胞苷酸的收率为80%。 尚辅网 （六）胞二磷胆碱－生产工艺 （二）黏性红酵母发酵法 国外发现一株粘性红酵母可高产胞二磷胆碱。 产生胞二磷胆碱的反应体系（g/L）：葡萄糖140；MgSO47H2O 6；5’-C