电离辐射秀导pEgr-hPTEN表达增强体外抗肿瘤作用的研究.pdfVIP

中华医学会全国医用辐射防护与安全研讨会论文汇编 电离辐射诱导pEgr-hPTEN表达增强体外抗肿瘤作用的研究 田梅 朴春姬 杨巍 李修义 (吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物重点实验室，长春，130021) 质瘤细胞SHG一44增殖、细胞周期进程及诱导细胞凋亡的作用。方法采用分子克隆技术构建 X射线照射，提取胞浆蛋白， 筛选，获得稳定转染细胞株SHG-44-sPTEN，体外接受0Gy．10Gy 经Western blot检测其表达；稳定转染细胞和未转染对照细胞接种于6孔培养板，每种细胞接 种4组，每组3复孔，接受不同剂量0-10GyⅪ射线照射后每两日每种细胞取1组进行计数，绘 制细胞生长曲线；采用Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒检测肿瘤细胞早期凋亡；应用流式细胞 仪检测细胞周期进程。 结果经酶切鉴定所构建表达载体pEgr．hPTEN构建正确并具有辐射诱 导表达增强的特性，各稳定转染照射组PTEN的相对表达量均比未转染照射组高； 5Gy组相对 相对表达水平随照射剂量增加而增加。稳定转染联合x_射线照射可明显抑制肿瘤细胞的增殖，未 组细胞数明显低于未转染假照组，第8天仅为未转染假照组的27％；稳定转染细胞接受不同剂 量射线照射后，均从计数的第1天开始细胞数即明显低于未转染假照组及稳定转染假照组；第8 天转染各剂量照射组细胞数均明显下降，分别为未转染假照组的7．7．13％，为稳定转染假照组的 30-50％，且各稳定转染照射组细胞数均明显低于其相应的未转染照射组；5Gy以内随照射剂量 增加抑制作用更明显，第8天转染加5Cy照射组细胞数仅为未转染假照组的7．5％，为稳定转染 照射对胶质瘤细胞生长有明显的抑制作用，5Gy以内随照射剂量的增加，抑瘤作用更明显。稳定 转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数较稳定转染假照组和未转染照射组均明显增加，且各转 染照射组早期凋亡细胞百分数均较未转染假照组明显增加，各转染照射组之间剂量效应关系明 显，5Gy以内随照射剂量增加，早期凋亡细胞百分数明显增加，转染加1 Gy照射组早期凋亡细 胞百分数为稳定转染假照组的1．5倍，为未转染照射组的1．9倍，为未转染假照组的3．4倍，：转 染加2Gy照射组为稳定转染假照组的2．1倍，为未转染照射组的2．5倍，为未转染假照组的4．4 倍；转染加5Gy照射组早期凋亡细胞百分数最高，为稳定转染假照组的2．3倍，为未转染照射 组的3．3倍，为未转染假照组的5．1倍；稳定转染假照组早期凋亡细胞百分数明显高于未转染假 照组，是未转染假照组的2．2倍；提示稳定转染联合辐射可诱导肿瘤细胞早期凋亡明显增多。稳 中华医学会全国医用辐射防护与安全研讨会论文汇编 定转染联合辐射细胞周期各时相的变化发现： 稳定转染加不同剂量照射组与未转染假照组和未 转染照射组相比均表现为明显的G0／G1期阻滞，G0／G1期细胞明显增多；稳定转染不同剂量照 射组G2／M期细胞均明显高于单纯稳定转染组：s期细胞与未转染假照组和未转染照射组相比有 减少的趋势但差异不显著。结论本研究成功的构建了辐射诱导表达载体pEgr．hPTEN，体外基 因．放射联合治疗可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多，具有显著的肿瘤抑制作用。本研究为提高临床 肿瘤放疗疗效奠定了理论和实验基础。 y射线联合HSV—tI【，GCV基因治疗系统抗肿瘤动物实验研究 陈治国杨业鹏周梅占晓海沈嵌剑沈磊李五岭 (北京大学基础医学院放射医学教研室，北京100083) 在前述的体外实验中，我们观察到Y射线与HSV-tk／GCV基因治疗系统联合应用对体外培 疗系统联合应用对肿瘤的治疗作用，我们利用阳离子脂质体介导瘤内注射法将HSV。tk基因导入 荷瘤小鼠的瘤体内，腹腔注射GCV合并局部移植瘤Y射线照射，观察了两因素单独及联合治疗 对荷瘤小鼠局部肿瘤生长变化和肺转移瘤结节形成的影响，并就联合治疗对抗肿瘤免疫反应的影 响进行了进一步的探讨。 材料和