Poloxamer对海绵细胞保护作用研究初探.pdfVIP

辽宁·土at 奎国瘁耳t静垃术与露耳番曲学术套议语文毒 2006．8．2-6 Poloxamer对海绵细胞保护作用研究初探 曲翊1,2’孙黎明1,2宋悦凡1,2虞星炬1金美芳1张卫”‘ 1．中国科学院大连化学物理研究所海洋生物产品工程组大连116023 2．中国科学院研究生院北京100049 5 免机械剪切力等对细胞的破坏作用．本文通过向离散液和培养液中添加细胞保护剂的方式，提高了海 绵原细胞的纯化率和细胞活力．同时，Poloxamer能在一定程度上抑制细胞的贴壁分化现象，提高了 海绵原细胞的增殖潜能． 关键词：Poloxamer海绵原细胞 Poloxamer是一种新型的高分子非离子表面活性剂，它能够改变培养液的表面张力，避免在搅动 过程中产生的气泡对细胞的破坏作用【1】。据报道，在生物反应器和无血清培养基中，它作为一种细 胞保护剂能够提高细胞的存活率。近几年来，许多研究哺乳动物和昆虫细胞培养过程中使用了这种保 护剂，并取得了良好的效果[2，3，4，5]。海绵细胞的分离过程是一个化学分离加机械分离的过程，有大 量离心和清洗的步骤。在反复添加分离试剂和离心洗涤的过程中，会产生气泡，对海绵细胞产生破坏 作用。本实验拟通过添加保护剂的方法，找到降低伤害的方法，以提高细胞的活力，进而提高细胞培 养时的存活率和生长速率。 1．材料与方法 1．1实验方法 取黄海繁茂膜海绵，经过前处理之后，等分为两份，一份使用不含Poloxamer的离散液进行细胞 行活力检测。将混合细胞进行低速离心，贴附聚集，纯化得到海绵原细胞。以106浓度为条件进行原 细胞活力检测。将得到的原细胞以100为浓度进行接种，培养液成分见下表所示： 实验标号 离散使用药品 细胞培养液成分 1抖 人工海水十0．01％Potoxamer+3．8％M199+VC++PHA 不含Poloxamer 2捍 人工海水+3．8％M199+VC+PHA 不含Poloxamer 3捍 人工海水+O．01％Poloxamer+3．8％M199+VC+PH,5 含0．01％Poloxalner 4撑 人工海水+3．8％M199+VC+PHA 舍0．01％Poloxamer 1．2观察指标 1．2．1细胞计数 将培养的第0，1，3，5，7天作为检测点，使用血球计数板，镜检计数． 1．2．1MTT法 将培养的第0，1，3，5，7天作为检测点，每实验组取3个平行样进行MTT活性检测。检测方 法见【6】。 1．2．2增殖细胞核抗原(PCNA)检测 将培养的第0．1，3．5，7天作为检测点，采用免疫组化法进行PCNA活性检测并计数。 +作者E-mail：g尘@gi￡e：§￡：￡坠；．．通讯作者E．mail：weizhang@diep．粒．∞ 146 a．q·土电 奎■嘻洱生曲技术与喀谭奄曲学术奎{‘静文毒 2006．8．2q‘ 2．实验结果： 图1显示，在海绵组织离散时加入保护剂Poloxamer能够明显提高细胞活力。同时，图2中各项 指标的检测结果也显示了在离散对加入Poloxamer(4#)对细胞的保护作用。 0．7 0．6 O．5 蚓0．4 } 2 0．3 0，2 0．1 0 混合细胞 原细胞 不同海绵细胞体系 图1 Poloxamcr) ProtectioneffectofthePoloxamertomixed cellsandenric