H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护持续期研究.pdfVIP

H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护持续期研究。 姜永萍1，张平静1，左青山1，夏俊1，刘丽玲1，陈化兰1# (1中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室， 哈尔滨，黑龙江，150001) [摘 要] (H5N1)攻击时，其死亡保护率为7／8。DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA550p．g首次免疫5周龄商品蛋鸡，首次免疫后3周以同 样剂量和途径两次免疫，在开产前(免疫后16周)进行第三次免疫，在免疫后4周、8周、18周、28周以及50周的攻毒试验中． pCAGGoptiHA5可以诱导长达一年的免疫保护，具有极高的现地应用价值和开发前景。 [关键词] 禽流感H5亚型DNA疫苗免疫保护持续期 与常规疫苗相比，DNA疫苗不仅具有有效激发 解法提取，聚乙二醇纯化质粒DNA(参照J．萨姆布 特异抗体反应与CTL细胞免疫的优点，同时还具有 鲁克主编的《分子克隆实验指南》)，紫外分光光度计 高度安全稳定、不受宿主种属特性及免疫状态限制、 可反复加强免疫的优点，尤其重要的是，DNA疫苗 用。 免疫诱导的免疫记忆应答持久，免疫保护持续期 1．3试验动物 SPF鸡由哈尔滨兽医研究所实验 长[1_2]，这些特性使得DNA疫苗的研究与开发更具动物中心提供，海兰褐蛋鸡购自哈尔滨联众牧业发 实用性和迫切性。 展有限公司北牧养殖场(公鸡占20％，母鸡为 80％)，所有试验动物实验期间饲养于禽病感染实验 ＼我们构建的H5亚型DNA疫苗质粒 室的负压隔离器中。 pCAGGoptiHA5不仅可以以低剂量水平免疫SPF 鸡和商品蛋鸡，还可以用于水禽的免疫预防[3-el。本1．4H5亚型DNA疫苗对SPF鸡的免疫保护持续 研究进一步对H5亚型DNA疫苗质粒期测定 pCAGGoptiHA5lOng两次免疫，首次免疫后3周 pCAGGoptiHA5对SPF鸡、商品蛋鸡的免疫保护 以同样剂量和途径两次免疫，在一次免疫、两次免疫 期进行了研究，pCAGGoptiHA5作为免疫效果良 好、免疫保护持续期长达一年的DNA疫苗，具有极 后、免疫后28周以及免疫后50周进行了Gs／GD／ 高的现地应用价值和开发前景。 1材料与方法 第3天、第5天和第7天采集每只鸡的泄殖腔拭子 1．1病毒 攻毒用高致病力禽流感病毒(HPAIV)和喉头拭子进行病毒分离与滴定，并在免疫后每周 采集其翅静脉血检测HI抗体，观察其HI抗体的动 A／Goose／GuangDong／1／96(H5N1)[Gs／GD／1／96 态消长规律。 (H5N1)]和A／Duck／ShanghaiNanhui／16／2004 L5 (H5N1)EDK／SHNH／16／04(H5N1)]由哈尔滨兽医H5亚型DNA疫苗对商品蛋鸡的免疫保护持 研究所农业部动物流感重点开放实验室保存。 续期测定将50只5周龄商品蛋鸡用DNA疫苗 1．2质粒及其制备含有密码子优化的基因 质粒pCAGGoptiHA550#g首次免疫，首次免疫后 3周以同样剂量和途径两次免疫，在开产前(免疫后 optiHA5的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5由作 者构建[．]。在JM109中扩增DNA疫苗质粒，碱裂16周)进行第三次免疫，每次免疫后、免疫后30周 ·项目简介：国家重点基础研究规翅“973”(G1999011902)项目资助。 作者简介：姜永萍(1972一)，女，甘肃会宁人，副研究员，博士，主要从事禽漉感基因工程疫苗及1Ir流感病毒分子生物学研究．#通讯作者．Tel／ Faxl0451-E一眦