中国汉族冠心病人群细胞间粘附分子-1基因多态性与其它暴露因素的交互作用的研究.pdfVIP

论文汇编 AC一4 中国汉族冠心病人群细胞间粘附分子一1基因多态性 与其它暴露因素的交互作用的研究 汪明 李艳 武汉大学人民医院检验科430060 heartdis． 冠状动脉粥样硬化性疾病(简称冠心病，coronary 对象与方法 ease。CHD)是一种复杂的疾病，其具体发病机制尚未完全明了。多一、研究对象 数学者认为与环境和遗传因素密切相关。近年来．炎症反应在动 脉粥样硬化机制中的作用越来越受到人们的重视IⅫ．而细胞粘附 分子因介导了血管内皮细胞(VEC)、白细胞和血小板之间以及与 血管内皮基质问的相互粘附作用．促进炎症反应和血栓形成，因 性心脏病的诊断标准。 而在冠心病的发生发展中具有重要作用。细胞间粘附分子一1(in． adhesion tercellularmolecule一1，ICAM—1)作为一种重要的炎症介 均年龄(58．8+14．7)岁。 质和可信的炎症标志物．是导致局部炎症反应和血栓形成的重要 所有对象均为湖北地区汉族非血缘个体，且排除脑梗死、周 因素14t，在缺血性心脑血管疾病的病理过程中发挥重要作用[5-61。国 围动脉栓塞、家族性高胆同醇血症及严重肝肾疾病等。 外研究显示．ICAM—l基因第4和第6外显子分别存在G似和Ⅳ 二、方法 nucleotide G转换的单核苷酸多态性(single polymorphism．SNP)17一 S1．分别导致a弭1R和K469E的氨基酸改变。并且与多种炎症性疾 采用改良碘化钠法【lll提取外周血白细胞DNA。 病相关睁m。因此，本课题采用PCR—SSP和PCR—RFLP技术．对我 2．引物设计与合成：参照文献I纠|l，设计5条引物(表1)，其 国汉族冠心病患者和健康人群的基因多态性分布进行调查．并结 合冠心病的其它环境暴露因素就两者间的交互作用对汉族人群 quence—specific 冠心病的影响进行探讨。 927bp条带。以上引物均由北京赛百盛公司合成。 表1 ICAM一1基因PCP．扩增引物序列 3．PCR—RFLP和PCR—SSP法基因分型：(1)K469E多态的基4．血脂水平测定：酶法测定血清总胆固醇(TC)和甘油三酯 因分型采用PCR—R兀P法，扩增体系为20“l，含lpmol／Ixl引物 P1、P2，0．2mMdNTP，IUDNA聚合酶，57l模板DNA，lxPCR Taq 定。以上测定均在OLYMPUSAUl000型全自动生化分析仪(日 缓冲液(含1．5ramMgCl2)；扩增条件：96℃预变性7min，96％变性 35s，64℃退火60s，72℃延伸35s。循环35次后，72℃再延伸7min， 本)上进行，检测质控均符合英国RIQAS国际质控标准。 BstU 取1071扩增产物，加入10UI内切酶(New BioLabs． 三、统计学分析 England USA)．于60℃孵育4h。(2)G241R多态的基因分型采用PCR—基因型频率采用频率计数法计算：计数资料、多态性位点 SSP技术。扩增体系为20山，含0．5pmol／pJ特异性引物P3(或 P4)、P5，0．1mMdNTP，0．6U TaqDNA聚合酶，4pJ模板DNA。1X PCR缓冲液(含1．SmM 归分析K469E基因型及其它危险因素与CHD的关联和交互 MgCl2)；扩增条件：94℃预变性5min。按