大孔树脂在两性霉素B原料药纯化工艺中的应用研究.docVIP

大孔树脂在两性霉素B原料药纯化工艺中的应用研究 摘要 通过考察多种型号树脂对原料药中杂质的吸附效果，筛选出几种对原料药中杂质有选择吸附性的树脂 ，然后时这几种树脂的吸附条件进行研究 ，确定了30 倍树脂和500 m m ：60 1Tlrn 柱径 比的最佳吸附条件。最后，利用不同极性树脂对原料药中杂质的吸附效果的差异性，研究不同树脂混合的最佳比例 ，结果发现在树脂 M 一1 ：M 一2 为 3．6 ：6．4 时，原料药中总杂质和最大单一杂质量下降最明显。 关键词大孔树脂吸附 两性霉素B为多烯类抗真菌药物 ，临床上用 于治疗深部真菌引起的内脏或全身感染。随着医疗水平的提高，器官移植和肿瘤切除等重大手术越来越普遍，真菌深部感染的发生率也随之上升。有限公司是专业生产原料药及其制剂注射用两性霉素 B和注射用脂质体的企业，其中注射用两性霉素B 脂质体是国内独家生产品种 。为进一步提升产品质量 ，本研究利用不同极性的树脂 n 对原料药中杂质的选择吸附性对进行纯化 ，有效降低了两性霉素B原料药中的相关物质含量 ，同时提高了产品收率。 1材料和仪器 各型号大孔树脂口 ；原料药 (有限公司生产 ) ；600 m m ×50 m lll层析柱 ；高效液相色谱仪 (A gilent 1100 )；Y Z 156 恒流泵；磁力搅拌器；恒温水浴锅 ；N ，N ．二甲基甲酰胺 、乙醇、甲醇、丙酮等(均 为工业 级试剂 )。 2实验与结果 2．1单个树脂筛选 根据的性质及生产需要进行用于杂质吸附的单个树脂型号筛选研究 ：先对文献报道杂质吸附效果好的树脂进行静态筛选，然后用通用方法对初步筛选出的 20 余种树脂进行预处理并用常用树脂柱参数进行过柱实验(表1)，确定了对原料药中不同杂质吸附效果好的几种树脂型号 。从表1可以看出，经过M ．1 或 M 一2 树脂吸附后的两性霉素B原料药中的总杂质含量均降低了约2％，最大单一杂质含量也明显下降。因此 ，用大孔树脂吸附两性霉素B原料药中的杂质可行且效果显著。2．2 最佳柱径比及树脂倍数确定 2．2．1柱径比筛选 选择柱径比分别为500 m m ：20 1TUTI、500 m nq ：30m m 、 5 0 0 m lTl ：4 0 rn nl、 5 00 m m：5 0 m m 、 5 0 0 1TnTI ：6 0m m 和 500 m m ：70 m m 的 M ．2 树脂柱 ，在同等树脂倍数、上样温度、pH 和过滤速率条件下动态过柱 ，考察经树脂吸附后的原料药中的总杂质含量下降的百分数，最终择优选择的最佳柱径比为 500 m m ：60 m m (表2 )。 2．2．2树脂倍数筛选 同等条件下，分别单独在吸附效果较好的M 一2树脂柱中加入10、20、30和40倍产品量的大孔树脂，根据杂质下降的实验结果选定吸附效果最佳的树脂倍数，然后用更小的等分法进行同等条件下的实验 ，实验结果见表3和表4 从实验数据可以看出，30 倍产品量的树脂为最佳杂质吸附树脂倍数。继续用0倍产品量的树脂进行4组重现性杂质吸附实验，实验结果见表5。 通过数据对比可以看出，30 倍产品量的最佳树脂倍数和500 m m ：60 m m的最佳柱径比的确定能进一步优1 4化树脂对原料药中的杂质吸附效果。 2．3 混合树脂组合及其比例的筛选 各种实验结果都表明，树脂对两性杂质的吸附效果明显，但不同型号的树脂吸附的杂质种类不尽相同。因此，利用不同型号树脂对原料药中杂质的选择吸附性 ，用蠕动泵控制树脂柱中溶液的添加速率 ，在30 倍产品量的混合树脂和 500 m m ：60 rnnl的柱径 比条件下进行混合树脂对原料药中杂质的吸附实验，结果发现混合树脂 M ．1+M ．2、M ．3+M ．4、M 一5+M 一6的吸附效果较好 (表6 )。 从表6 可以看出，M ．1+M ．2 树脂组合的吸附效果最佳 ，故在30倍产品量的混合树脂和500 m m -60 rnlTl的柱径比条件下进一步研究 M ．1 和 M ．2 两种树脂在以不同比例混合时对原料药中杂质的吸附效果 。实验结果 (7 ) 表明，在各吸附条件基本恒定的情况下，当树脂混合比例为 M ．1 ：M ．2 为 4 i 6 时，其吸附两性霉素B原料药中杂质的效果较优。 继续在 M ．1 ：M ．2 为 4 ：6 的比例周围进行细等分比例实验，研究吸附原料药中杂质效果最优的M -1和 M ．2 两种树脂的混合比。实验结果(8 菱明， 在 M -1 ：M 一2 为 3．6 ：6．4 时，混合树脂对原料药中杂质的吸附效果最好 ，总杂质含量下降3．30％、最大单一杂质含量下降0．82％，较其它比例的混合树脂 的杂质吸附效果都更显著 。 3结语 本研究依据不同极性的大孔树脂的选择吸附性 ，探讨了其在原料药纯化工艺中