阴沟肠杆菌耐药现状与ampC基因表达状况研究.pdfVIP

位组成。A亚单位参与酶反应中DNA链的断裂和重接，B亚单位参与酶反应中能量的转换和ATP的水 解。喹诺酮类药物作用的靶位是细菌的DNA回旋酶，阻止DNA的超螺旋型转化产生杀菌作用。DNA回 旋酶A单位(鄂．A)发生点突变是造成细菌产生耐药性的主要原因。因外研究以发现gyrA基因突变位点 集中发生在N末端核苷酸序列为199—318的区间内，即所谓氟喹喏酮类药物耐药决定区。 率研究根据gyrA基因已知序列，针对氟碴喏酮类药物耐药决定区压域设计了两对引物，经PCI／反应 strand eonf,口r- 后，扩增出307bp片段，与预期结果相符。白1989年Orita等首次报道单链构象多态性(Bingle 理是序列不同的单链DNA，形成不同的构象，在中性聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁徙率不同形成不同的条带。 本研究表明大肠杆菌标准株和敏感株gyrA基因电泳后在同一位置，碱基未发生变化。而4株耐药菌株其 DNA单链与标准株及临床敏感株迁移率不同，可以推论4株耐药菌株其gyrA基因发生了突变。 AsD一87一Am突变位于氟喹酮类药物耐药决定区，与文献报道相同。本研究发现的对rA基因氨基酸184 位点c—A碱基突变致组氨酸突变为无冬酰氮尚未见文献报道，因此我们认为我院分离的大肠杆菌对氟 喹酮类药物产生耐药性与盯rA基因的点突变有关。e株虽然存在碱基突变井未导致氨基酸的变异为无意 突变。其耐药可能与细菌膜对药物通透性下降或主动流出系统有关。 A9．阴沟肠杆菌耐药现状及ampC基因表达状况研究 浙江大学医学院附属一院传染科(310003) 周志慧李兰娟俞云松马亦林 抗菌药物为人类对付病原菌引起的各种感染中提供了有力手段，但其广泛应用甚至滥用往往在医院 内重症感染患者中选择出多重耐药的致病菌，造成治疗困难。目前G(一)杆菌中最引人注目的问题是细 题，故耐药情况更为严重。本文对l“株阴沟肠杆菌的药敏情况、ESBLs的检测情况及—pC基因表达状 况进行研究。现将结果报道如下。 材料与方法 一、菌株 收集2000年4月至2001年6月浙江大学医学院附属一院、杭州市第～人民医院、杭州市第三人民医 院、浙江大学医学院附属邵逸夫医院、嘉兴市第一人民医院和绍兴市第二人民医院临床分离的阴沟肠杆菌 共144株。 二、药敏纸片 ． acid，AMC)、环 (Su／oeranme，cPS)药敏纸片为BBL公司产品。 三、药敏检测 NCCLS规定的标准。 四、ampc基因检测 一102一 引物合成参照BamaudG等报道的序列，以Ⅲpc基因的结构区为编友区： 引物1：5’一(32)聪船[℃GGc^|I℃盹耵o：Icr(st)一3’ 引物2：5’一(612)C^G㈣^0ccGC兀!^AGG^(s93)一3’ 五、PER产物特异性分析 选阳性克降白斑，碱法抽提质粒DNA，EcoRI酶切分析鉴定插人片段，并对质粒DNA进行序列分析，将所 测序列与C,eneBank颁布的序列进行比较。 六、Ⅻ们基因表达状况及ESBLs检测。 CTX和CD03的抑菌圈直径差是否大于5mm来判断有无ESBLs的产生(产EsBL)。 结 果 一、144株阴沟肠杆菌的药敏状况 144株阴沟肠杆菌对奥格门汀、头孢呋辛的敏感率较低，均在25％以下，对氮曲南、头孢噻肟、环丙沙 星、他唑西林和阿米卡星的敏感率也不高，仅在35—55％之间。而对头孢赈酮+舒巴坦、头孢吡肟敏感率 在60％以上。对亚胺培能的敏感率高达98．6l％。见表1。 表1 144株阴沟肠杆菌的药敏情况 抗生索 敏感(株) 中介(株) 耐药(株)