猪瘟病毒E2蛋白抗原单表位基因的融合表达与其免疫活性的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 猪瘟病毒E2蛋白抗原单表位基因的融合表达 及其免疫活性的研究‘ 刘思国，涂长春1，余兴龙，张茂林，刘伯华，吴健敏，殷震 30062) (解放军军需大学，军事兽医研究所病毒室，长春，I 着非常重要的角色。目前在猪瘟病毒{CSFV}主要免疫原蛋白E2上已经成功地定位了两个抗原表位。 表达载体进行基因的融合蛋白表达及其功能研究的报道。本实验为了探讨猪瘟病毒E2聋自抗原表位的生物 和E的基因序列，构建了重组表达载体，并进行了重组蛋自的表达、纯化及其免疫功能等方面的研究研究。 现将结果报告如下： 1、材料和方法 1．1材料 菌种和质粒：BL2 克公司合成。在引物的5 部引入了Rsal的酶切位点，以便于重组质粒酶切鉴定用。引物序列分别为： CF5’ cactaccac cca c抗原表位基因 oggg墨!曼里t ctggaa cgat gga照ta孛a CR cattca aat a 5’。嗣L皇旦L丝ccgt gttgca cgtggttgt 5’ gatcct caaCCCatc a3 D抗原表位基因DF cgg gttcgac妇tad aactgagga DR57 catctcccatttcct a3 cgaagaat皇qctgaagt cagttg EF aac CCCaacaat E抗原表位基因 agcagtgag ctgcg 5’cg她ca 7 ER 5’ acttct tt3 gttcgc ttg cgg垦熊!里t啦tadc gag ’本研究为国家自然科学基金重大项日1)资助课题 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 1．2方法 1．2．1猪瘟病毒E2蛋白3个抗原表位基因的分子克隆及核苷酸序列测定 体pGEX一3X进行连接、转化，重组质粒用限制性内切酶Rsal进行酶切鉴定。 酶切鉴定，酶切后的产物在l％琼脂糖凝胶上进行电泳。将酶切鉴定为正确的重组质粒进行核苷酸序列测定， 核苷酸序列测定是由大连宝生物工程公司完成的。 1．2．2重组质粒的诱导、表达及纯化 亲和层析柱对融合蛋白进行纯化，将收集的液体混合后进行SDS／PAGE电泳，确定纯化蛋自的纯度。 1．2．3融合蛋白的免疫活性检测 检测，一抗为兔抗E2阳性血清(1：500稀释)。转移试剂及主要实验步骤见分子克隆实验指南。 g／只，免疫1周后采血测定抗体的消长情况， 免疫方式仍然采用皮下多点注射，每只家兔的免疫剂量为25q 次，连续观察体温反应一周，评定单表位融合蛋白与多表位融合蛋白在免疫保护方面的差异性。如果存在未 发热的家兔，则需要待其它家兔体温下降为正常体温后再继续测定1周体温，每天2次。 2、结果 2．1克隆基因的酶切鉴定及序列分析 选到的3个不同抗原表