逆转录病毒介导的小鼠IL-21基因的食管癌细胞中的表达的探究.pdfVIP

论文汇编 2cCccLLM硼20 变化：未处理和经空载体pTZU6+I处理的肝癌SMMC之一，在人类基因功能研究、信号转导研究及基因治疗方面已 细胞可见核膜黄色、核内有较多棕色颗粒，为阳性。经siRNA— hTERT—pTZU6+I质粒处理组可见细胞黄色明显减弱、变浅，说明炎㈣、丙型肝炎[71的治疗研究已取得一定进展，成功地下调了相关 hTERT蛋白表达降低。 基因的表达。本课题基于以上研究构想，通过RNAi下调h肛RT 2．3 基因的表达以治疗肝癌。 iRNA—hTERT—pTZU6+I转染对肝癌细胞7721细胞周 期的影响：经流式细胞仪检测，转染pTZU6+I斗空载体组细胞与 未处理组相似，均显示以S期细胞为主，G2／M期细胞、G1／G0期 因外显子不同区域、不同碱基含量的三个siRNA片段，均为 细胞变化不明显，而肝癌SMMC一772l细胞经siRNA—hTERT— pTZU6+I质粒处理后显示，S期细胞明显减少(由60．2％分别减少 到30．0％和49 7％)，G1／G0期细胞显著增加(由37％分别增加到 65．8％和50 3％)，G2／M期细胞亦有少量增加(由28％分别增加到 43％和3．5％) 讨论 原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，近20年来其死 亡率增加了4117％，已成为我国第二位的肿瘤病因。近年来研究 导RNAi，定向抑制了hTERT靶基因的表达。 表明肝癌的发生、发展、预后与端粒酶异常表达密切相关。端粒酶 全酶由端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白(TPl)和端粒酶催化 亚基(hTERT)三部分组成。其中hTERT基因是合成端粒酶全酶的 限速因素，与肿瘤的关系更为密切，90％以上的肿瘤组织呈阳性。 增殖，逆转了肝癌细胞的恶性表型，为肝癌基因治疗的临床应用 资料显示hTERT基因在肝癌的表达阳性率约为89．5％，与肿瘤的开辟了新的思路。 发生、发展及预后密切相关。 参考文献(略) RNAi近年发展迅速，已成为分子生物学研究的主要技术手 文中插图(略) CB-3 逆转录病毒介导的小鼠lL一21基因在食管癌细胞中的表达研究 李巧霞 单保恩 河北医科大学第四医院科研中心050011 白细胞介素一21(inteleukin一2i，IL一21)是一种新发现的细胞12细胞株 因子，与IL_2、IL一4及IL一15有同源性，但与IL一15相比，IL-21 Culture 仅表达于活化的外周血CD4W细胞上91；IL一21受体也仅表达在ATCC(American Type 淋巴组织，特别是在活化的T细胞、B细胞和NK细胞口‘I。IL一21 modified 胞用古有10％小牛血清的DMEMfDulbeeeosEagles 能诱导活化的T细胞增殖，促进自然杀伤细胞(natural Re— killer, NK)成熟，在抗肿瘤免疫应答中起重要作用，用鼠源IL-21进行的search Bankl61。用RPMIl640培养基培养。 动物实验已显示出有效的抗肿瘤效果。本研究将小鼠IL一21基 1 IL_ 因，利用逆转录病毒载体转染包装细胞Ⅲ2和PA317，筛选高滴21全基因序列，在成熟蛋白编码区设计了一对引物，序列如下： 度病毒上清，感染人食管癌细胞TTn细胞株，得到阳性表达的肿