酰肼交联透明质酸衍生物的生物相容性的探究.pdfVIP

酰肼交联透明质酸衍生物的生物相容性研究 贺艳丽1一一，陈建英2，王玉玲2，刘杰2，娄红祥1 酸和(1一口一3)N一乙酰基一D一氨基葡糖双糖单位重复连接组成。它是构成皮肤、玻璃 体、关节滑液和软骨组织的重要成分，具有独特的理化性质和生物学功鲋”。HA具有良 好的润滑性、黏弹性和非免疫原性，在临床上最早应用于眼科和骨科手术的黏弹剂补充疗 法。迄今为止，HA在骨性关节炎(OA)和类风湿性关节炎(RA)的防治、预防术后粘连瞳卅 以及作为多种药物制剂载体睛。1等方面的应用均取得成功。 天然的HA水溶性极强，在溶液中具有线链状的一级结构哺】、单螺旋状的二级结构一1 和由于疏水作用形成的蜂巢状三级结构m】，但在组织中易扩散和降解，有体内存留时问 较短的不足，降低了临床使用效果。近年来大量针对HA衍生物的研究表明，HA经修饰 或交联，改变其溶解性或通过共价结合的分子桥将HA分子连成网状结构后，在保留良好 生物相容性的同时，具有可抗酶降解、延长体内存留时间等优点n“埘，使其在生物医学领 域得到进一步地开发和应用。目前使用酰肼修饰HA羧基制备衍生物，应用于研究制备 行了研究。但对不同交联度的以己二酸二酰肼(adipic 外的降解进行了比较研究，以冀初步评价其作为可降解性植入材料的应用价值。 1材料 璃酸酶(HAm，1500单位，上海第一生化药业公司)。 ． (哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)。 号：SCXK。 2方法 176 2．1体外酶降解试验 h。强力搅拌分散，过80目筛(筛孔 酸氢二钠和150wxrml／L氯化钠，pH6．3)，37℃浸泡24 0．2mm)，筛下物倒入玻璃滤器中，3 u／ml的HAse溶液。具 19，转移至具塞试管，加入10ml缓冲溶液或浓度为6、12、18、24、30 标，吸收度(0％。．n)为纵坐标做线性回归，计算直线的平均斜率。 2．2体内存留试验 备用。 一 实验大鼠常规饲养1周后，随机分为3组，腹腔注射l％戊巴比妥钠(30mg／kg)麻醉， 背部剪毛，常规消毒背部皮肤，无菌条件下背部沿中线作2—3em的纵行切口，用无菌镊子 向一侧分离皮下组织，将灭菌样品埋植入背部皮下，缝合，关闭切口，术后连续3d交替肌 注庆大霉素与青霉素防止切口感染，常规饲养，定期处死动物，观察埋植物降解吸收情况， 收集植入物后称重，并观察局部毒性。 3结果 ‘ 3．1体外酶降解试验 样品浸泡吸水后体积增大，形成几乎透明的凝胶块，强力搅拌分散后形成无色透明胶 粒。以HAse浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做线性回归。直线的平均斜率作为样品耐 酶解性的指标，其意义为单位活性酶在实验条件下水解样品后产生可溶性糖的量，斜率值 越小则样品抗酶性越大，A：、A2、南的体外抗酶性见图1。 图1 HA—ADH衍生物的体外抗酶性 3．2体内存留实验 177 图2HA—ADH衍生物植入大鼠皮下的状态 l引仁乡圜 笔丝圜 图3 姒一A硼缅生物的体内降解曲线 ‘ 大鼠植入样品后，切口愈合良好，无水肿、积液和化脓等症状，饮食活动正常。处死大 鼠后，观察各脏器无异常，样品植入部位无血管增生，无明显的纤维化包囊形成，植入物与 周围组织无粘连，肉眼观察无明显刺激反应，HA—ADH衍生物植入大鼠皮下不同时间的 状况见图2。从植入样品在大鼠皮下的降解曲线(图3)可见，植入早期降解速度较后期 54％。 4讨论 Prestwieh等用平皿法和分光光度法比较单酰肼、双酰肼和多酰肼交联HA凝胶在体 178 外的耐酶性n6’17】。这两种测定方法都须与交联反应同时进行，其中平皿法适于厚薄均一、 与平