石斛散对体外培养人视网膜细胞作用地研究.pdfVIP

石斛散对体外培养人视网膜细胞作用的研究 杨永升庄曾渊 中国中医研究院眼科医院(100040) 王津津 北京市眼科研究所 李根林 北京市同仁医院眼科中心 徐艳玲 北京市宣武医院 视网膜色素变性(Retinitis 3种药组成，离心灭菌处理后以培养液稀释，保存 pigmentosa，RP)是 一种遗传异质的致盲性疾病，发病率约为l：3500浓度lg／L。各药pH ～4000，目前尚无有确切疗效的药物或治疗方法。右。 中国传统医学早在隋朝就已应用中药治疗，近年来 1．2．2视网膜神经细胞制备 国内用中医药治疗RP也有许多症状改善和稳定病 取眼库提供人眼球(已取走角膜)，在无菌条 情的报道。石斛散是我国两个最大的方剂古籍普济 件下，沿虹膜根部环形剪开，去除晶体和玻璃体， 和圣济总录中收录的以治疗雀目(以夜盲为主的疾 将视网膜与RPE层及脉络膜分离，立即置入D— 病)的一种方剂，主要由石斛、仙灵脾和苍术三药 Hank液冲洗2遍后，去除其他杂细胞，体视镜下 组成，具有滋补肝肾利湿的功效。本实验主要通过 去除大血管，用眼科剪刀剪碎，过300目不锈钢筛 观察该药对人视网膜细胞的增殖以及对谷氨酸损伤 网上，轻柔研磨，培养液冲洗并稀释，制成细胞混 的保护作用，探讨其在视网膜变性类疾病方面的作 x 悬液，计数调整细胞密度为3 106个／L。置于 用及机理，为临床治疗同类疾病提供依据。 37℃，5％C02培养箱中培养。 1．2．3中药对人视网膜细胞活性的影响 1材料与方法 中药组分为复方组、石斛组、苍术组、仙灵脾 1．1材料 组，阳性对照药物选择。取l块96孔板，先按设 1．1．1眼球来源 计加入不同组别及不同浓度的药物50t-L，另设药 由北京同仁医院眼库提供新鲜人眼球3个，供 物空白对照和细胞空白对照组，每组各设3个复 体眼球来源于角膜捐献者，离体8小时以内。所用 孔。将准备好的视网膜细胞悬液(1×106个／L) 材料伦理问题基于眼球捐献协议书。 50ul均匀加入各孔，而细胞空白对照组相应加入 1．1．2药物来源 IMEM培养液50ul。置于37 oC，5％C02培养箱中 石斛(Dendrobium．)、仙灵脾(HERBA 培养48h后，每孔添加MTr(四甲基偶氮唑盐) EPIMEDII．)产地河南，苍术(Atractylodes 20t-L。6小时后，小心吸出各孔液体，再加20％ Rhizome．)产地河南。IMDM培养液(PH。7．2。 7．4，渗透压为3000sm，Gibco，美国)；胎牛血清 用酶标仪比色测定吸光度(OD)值，测量波长 和胰蛋白酶(Hyclone，美国)；谷氨酸和四甲基偶 氮唑盐(MrI’)(Sigma，美国)；Rhodaminel23 物细胞活性。以上实验重复2—3次。 (Sigma，美国)。神经生长因子(NGF)(Sigma，美 国)，百路达(上海信谊药业有限公司)。