神经干细胞研究的新视野——脑肿瘤的起源与干细胞治疗.pdfVIP

第五届全国神经外科学术研讨会会议交流 135 神经干细胞研究的新视野 脑肿瘤的起源和干细胞治疗 朱剑虹周良辅昊惺 复旦大学上海医学院华山医院神经外科(200040) 基金项目：国家重点基础研究发展规划项目(973项目)(2001CB509907) 【摘要】 目的从神经干细胞发育生物学的角度探讨脑肿瘤的细胞起源和于细胞治疗脑肿瘤的 可能性。使用MYC基因和表皮生长因子受体(EGFR)基因转导神经干细胞和星形细胞比较其诱导 形成脑肿瘤的差异；采用重组腺病毒携带粒细胞一单核细胞集落刺激因子(GMCSF)转导神经干 细胞，探索干细胞治疗胶质瘤的可能性。方法重组逆转录病毒载体将MYC和EGFRVII基因转导神 经于细胞和星形胶质细胞。采用赣琼脂培养基测量克隆形成率的方法研究转基因细胞的生长特征． 并将转基因细胞立体定向接种于裸鼠颅内观察其脑内致瘤的病理特征。构建重组GM—CSF基因腺病 毒，并转导神经干细胞。将转基因表达GM—CSF的神经干细胞注入SCID小鼠MG—U87胶质瘤模 型中，观察神经干细胞的抗胶质瘤作用。结果转导MYC和EGFRVII的神经干细胞组(NSC—EGFR Ⅷ／MYC)的克隆形成率最高(27％)与其它各组比较有显著性差异(P001)。NSC—EGFRⅧ／ MYC组中有73％形成脑肿瘤，而NSC MYC组中仅有67％形成肿瘤，NSCEGFRⅦ组和星形胶 质细胞转导组中则没有肿瘤形成。NSC—EGFRⅦ／MYC组所形成的肿瘤性表现出高度的多样性，包 括胶质母细胞瘤、星形胶质细胞瘤和室管膜癌。转基因表达GM—CSF的神经干细胞治疗MG—U87 脑胶质瘤时，镜下可见到在胶质瘤原位有神经干细胞授润，抬疗组胶质瘤体积明显缩小，平均生存 期显著长于对照组。结论神经干细胞比星形胶质细胞更易转化形成肿瘤，部分脑肿瘤可能起源于 神经干细胞。转基因表达(；M—CSF的神经干细胞具有抗脑胶质瘸作用。 f关t词】神经干脑枇；蚋肿瘤 探讨脑肿瘤的细胞起源是深入研究肿瘤发生发展机制的核心问题。长期以来。神经病理学家根据 脑肿瘤的形态学特征来推测其起源，例如星形胶质瘤起源于星形细胞、少突胶质细胞瘤起源于少突胶 质细胞、髓母细胞瘤起源于神经母细胞。然而，脑肿瘤常常表现出高度的异质性…，这种异质性是多 细胞起源还是单细胞起源仍存在争议。有研究发现少突星形胶质细胞瘤中少突胶质细胞瘤成分和星形 细胞瘤成分都存在19q”1的缺失且胶质肉瘤中胶质瘤成分和肉瘤成分p53基因的突变部位相同”1，这 提示它们可能起源于同一细胞。另一方面，近年研究证实成人脑中存在能自我更新和多向分化的神经 干细胞，多种参与神经干细胞更新和分化的机制也在脑肿瘤的发生中起重要作用”“-。因此，我们假 设某些脑肿瘤可能起源于神经干细胞或前体细胞。本实验目的是论证这一假设，探讨MYC基因和 EGFRⅧ基因转导神经干细胞诱导其致瘤的可能性。同时，研究发现神经干细胞对脑胶质瘤有强烈的 趋化作用”1，因此本实验还利用重组腺病毒载体使神经干细胞转基因表达粒细胞一单核细胞集落刺激 因子(GM—CSF)，探索干细胞治疗胶质瘤的可能性。 资料与方法 stem 1人神经干细胞(neuralcell，NSC)系的建立：本研究中人类胚胎组织的使用遵守医学伦 理原则并得到医院许可。胎龄为9周的流产胚胎脑组织在无菌条件下收集并保存在4℃磷酸氢钠缓冲 液(PBS 第五届全国神经外科学术研讨会会议交流 公司生产)37℃温育l lion)。单细胞克隆化采_}{}j fj限稀释法在96孔板上进行。细胞克隆增殖后移至24孔板继续扩增。 2使用病毒载体进行干细胞的基因转移及其鉴定：(1)重组逆转录病毒转导细胞及其鉴定：重 霉素培养基筛选，Western blotting检测转导细胞GM—CSF蛋白的表达。 3．软琼脂培养基测量克隆形成率的方法研究转基因细胞的生长特征。 4．基因神经干细胞和星形胶质细胞的体内致瘤实验：颅内接种转基因神经干细胞实验：将转基 动物。第11周处死动物，观察肿瘤形成并测量其直径。