猪源大肠杆菌O20的分离鉴定与其致病性研究.pdfVIP

第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会2006年会议论文集 猪源大肠杆菌020的分离鉴定及其致病性研究 宋勤叶宣春龄左玉柱 (河北农业大学动物科技学院，河北保定071001) 摘要：从河北保定某规模化猪场病死哺乳仔猪肝脏和心脏中分离到l株革兰氏阴性杆菌，通过茵落形态、 培养特性和微量生化试验，鉴定为大肠杆菌，用大肠杆茵O抗原定型血清鉴定为020．该菌株仅时庆大霉 素敏感，对供试的其它13种抗菌药物均不敏感，表明分离菌株具有多重耐药性．动物致病性和毒素试验表 明，该菌株能够导致50％小鼠死亡，并产生热稳定肠毒素，为一株产肠毒素性大肠杆菌． 关键词：哺StA子猪：大肠杆菌；020；致病性；热稳定肠毒素 病原性大肠杆菌可引起人、各种家畜和家禽发病，尤其对婴儿和幼龄动物的危害更大， 常引起严重腹泻和败血症。猪大肠杆菌病主要见于刚出生至断乳仔猪，临床上主要表现为黄 痢型、白痢型和水肿型三种类型。流行病学调查表明，大肠杆菌病是我国养猪场常见的有重 要经济意义的细菌性传染病之一。 已知多种血清型的大肠杆菌能够引起仔猪发病，并且不同地区的优势血清型不同，即使 在同一地区的不同饲养场，优势血清型也有差别，并且大肠杆菌易形成耐药性，从而给该病 的免疫预防和药物治疗造成困难。因此，对当地或某饲养场流行的大肠杆菌进行血清型和耐 药性分析以及致病性研究，对大肠杆菌病的有效防治具有重要的理论和实践意义。我们从河 北保定某猪场发生腹泻的8日龄病死仔猪肝和心脏内分离到一株致病性大肠杆菌，并进行了 鉴别培养、生化试验、耐药性检测、血清型鉴定、致病性与肠毒素检测等试验，证明分离的 大肠杆菌为引起该猪场仔猪腹泻死亡的病原菌。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1病料 河北省保定市某猪场的哺乳仔猪从6d开始发病，表现为拉黄色稀便，衰弱，死亡很快， 病死率达70％--80％。无菌采取该猪场病死仔猪的心和肝脏，待检。 1．1．2培养基及其它主要试剂 普通营养琼脂培养基、伊红美兰培养基、SS培养基、麦康凯培养基和普通营养肉汤等 培养基，按生产厂家说明配制；肠杆菌科细菌鉴定微量生化反应管和药敏纸片，购自杭州天 和微生物试剂有限公司；大肠埃希氏菌O抗原定型血清，购自中国兽药监察所。 1．1．3实验动物 ICR雌性小鼠及3d乳鼠，均由河北农业大学动物科技学院河北省重点实验室 20～309 牛羊胚胎中心提供。 1．2方法 1．2．1细菌的分离培养与形态检查 取采集的病死仔猪的心和肝脏，划线接种于普通营养琼脂平板，37。C培养1824h，观 察菌落的生长情况及菌落的形态，并挑取单个菌落进行革兰氏染色，镜检。挑取疑似大肠杆 菌菌落接种于伊红美兰琼脂、ss琼脂和麦康凯琼脂等固体培养基，于37℃培养18-24h， 观察菌落的生长情况、形态和颜色。 1．2．2生化试验 取纯化好的细菌分别接种于不同的肠杆菌科细菌鉴定微量生化反应管中，37℃培养 24-48h后观察结果。 1．2．3药敏试验 采用药敏纸片琼脂扩散法(纸片法)进行。取适量18h的被检细菌肉汤培养物，均匀涂 布于普通营养琼脂平板上，贴上药敏纸片，37℃培养18h后，用游标卡尺测量抑菌圈直径。 1．2．4 O血清型鉴定 ．299． 猪传染病 将纯化的待检菌涂布于普通琼脂平板上，于37℃恒温箱中培养18h：用适量O．5％石炭 酸生理盐水洗下菌苔，制成浓稠菌悬液；121℃高压2h，破坏K抗原后即为待检菌的。抗 原；取制备的待检菌O抗原和大肠埃希氏菌O抗原定型血清各20儿，在玻板上混匀，30s 内出现明显凝集现象者为阳性反应。同时以菌悬液与石炭酸生理盐水混合物作对照，观察有 无自凝集现象。 1．2．5动物试验 1．2．5．1致病性检测 将纯化好的菌落接种于普通营养肉汤中，37。C振荡培养18h，细菌浓度为5．8×108个／mL。 mL／ 取菌液以0．2mL／R腹腔注射给ICR小鼠，6只