人参皂甙compound+K的制备、晶体结构与活性研究.pdfVIP

K的制备、晶体结构及活性研究· 人参皂甙compound 周伟，周珊 (复旦大学药学院生物合成教研室，上海200032) 摘要：从人参总皂甙的微生物发酵液中，采用硅胶柱色谱法和制备HPLC方法分离纯化得到人参皂甙 compoundK(C—K)，用MS、1H、13C-NMR及单晶X衍射法对其进行了表征和晶体结构测定．C-K晶体 (3)姗，y-3．7675(11)nm’，Z-4，∥t 三萜，A、B、C环均为椅式构象，D环为信封式构象，各环之间采用反式连接．分子问通过糖及结晶 水的-OH形成分子问氢键，使分子在晶体中按空间对称性进行堆积；分子内通过O：H2…0，、02-H：…0· 和0广H-．．．0-三个分子内氢键固定C-20位构型．体外细胞实验表明，C-K具有良好的抗肿瘤活性． 关键词：人参皂甙compound-K；制备；晶体结构：活性 人参皂甙compound 它是人参皂甙Rbl、Rb2及Rc等二醇型皂甙在肠道内的主要代谢产物11．’2’31。近年来，生物学活性研 究发现C．K具有抗基因突变，抑制肿瘤生长、浸润和转移，诱导细胞调亡等活性Ml。证实人参皂甙 Rbl等只是“天然前药”，发挥真正生物活性作用的实体是C．K。目前为止，对人参皂甙结构的报道 有单晶结构报道。本工作将栽培人参总皂甙进行微生物发酵转化，并通过硅胶柱层析和制备HPLC 分离获得C．K，用X射线衍射方法测定其晶体结构。药理学实验表明其有很好的抗肿瘤活性。 1 实验部分 I．I仪器与试剂 Jasco LC-MS质谱仪：MolecularDevices 400 P-1020旋光仪；Angilent vlnax酶标仪；Mercuryplus MHz核磁共振仪，TMS为内标：Bruker C18 SmartAI始x-CCD四圆单晶衍射仪，WatersSymmetry (150mm×7．8ram，71,tm)半制备柱，人参总皂甙，中国上海药材公司提供。 1．2微生物转化 菌种：从野山参土样中分离具有转化能力菌株Fungisp．229，并经紫外诱变提高转化能力。培养 基：玉米浆25 h，加入人 g／L，硫酸铵1g，L。发酵转化：28-30℃，150rpm培养72 g／L，葡萄糖30 参总皂甙，转化48h。 I．3提取与分离 发酵液以乙醇浸提72d,时，离心，减压浓缩得黑色浸膏。将浸膏以适量水悬浮，水饱和正丁醇萃取3 次，浓缩后以适量乙醇溶解，活性碳同流脱色，得总提取物。将此总提取物进行硅胶柱色谱分离， 定，lO％硫酸．乙醇显色，最后经制备HPLC纯化，得C．K(纯度为98％)，在乙腈．水混合溶液中于4℃ 下生长成无色针状结晶。 ’幕会项目：．I-海．SK研究‘j发腱幕会资助项目 联系人简介：剧佩(1944年生)，女．博I：．教授、博I?生导师．生要从事分予生物学方面研究．E-mail： pzhou@shmu．edu．cn 377 1．4微生物转化 菌种：从野山参十样中分离具有转化能力菌株Fungisp．229，并经紫外诱变提高转化能力。培养 基：玉米浆25 h。加入人 g／L，葡萄糖30g／L，硫酸铵lg／L。发酵转化：28～30℃，150rpm培养72 h。 参总皂甙，转化48 1．5提取与分离 发酵液以乙醇浸提72／ix时，离心，减压浓缩得黑色浸膏。将浸膏以适量水悬浮，水饱和正r醇萃 取3次，浓缩后以适量乙醇溶解，活性碳回流脱色，得总提取物。将此总提取物进行硅胶柱色谱分离， 定，10％硫酸．乙醇显色，最后经制备HPLC纯化，得C．K(纯度为98％)，在乙腈．水混合溶液中于4℃ 下生长成无色针状结晶。 1．6体外抗肿瘤活性实验