龙眼荔枝体细胞胚胎发生的细胞和分子生物学研究.pdfVIP

太组民荔枝体细胞胚胎发生的细胞与分子生物学研究’ 赖钟雄，王凤华，陈春玲，黄素华，桑庆亮，车建美，李冬梅，赖呈纯，郭文义， 张妙霞，李惠华，沈庆斌，林 莉，陈义挺，蔡英卿，吴金寿，陈振光 (福建农林大学亚热带果树研究所生物技术实验室，福州350002) 摘 要:本文介绍了近10年来我们在龙眠 荔枝体细胞胚胎发生的细胞与分子生物学以及相关 应用的研究结果.由龙眼幼胚或花药培养，获得了可长期保持、其有强烈体胚发生能力的松散 型肛性愈价组织系(FEC工由龙眼FEC建立了目前木本植物最为优良的体胚发生模式实脸系统， 肠性悉浮细胞培养、单细胞培养、原生质体培养、遗传转化及其体胚发生与植株再生系统.从 组织形态、生理生化、基因表达等方面对龙眼体胚发生过程进行的研究发现:①龙眼肠险愈伤 组织的胚胎发生为内起源;②龙眼体胚一般起源于单细胞;③龙眼体胚经成热培养后，在超徽 结构与代谢上发生了根本性的变化;④龙眼体胚发生过程中的内源激紊、多胺、同工阵、蛋白 质等呈现有挽律的变化，在体胚成熟过程中出现了3个新的工r“特异蛋白;。龙眼的体胚发生 过租中形态的变化伴随若MRNA的差异表达，对这些差异的cDNA片段进行的初步研究已获得1 个441bp的断序列以及1个与番茄APX有94%同汤性、长度为402加的cIR4A片段.参照龙眼 的方法，从荔枝也获得了FEC，并由之建立了胚性细胞愚浮培养系统、基因枪法和农杆菌介导 法的转基因系统 染色体数目和RAPD等分析表明，荔枝胚性愈伤组织存在广泛的遗传变异，并 且这些变异可以传递到成熟的体胚，这是荔枝体胚萌发难的根本原因. 关扭词:龙眼;篇杖:体胚发生;细胞生物学;分子生物学;生物技术 植物自然的胚胎发-f从合子开始的，包含着细胞分裂、分化、器官形态建成鸽一系列错综复杂的 发育过程，其实质是胚胎发育基因按特定的顺序表达的过程。然而，用合子胚来研次 始发生机理存在 许多困难。体细晌jwl胎分*1甭演合子膝发徐的特性，在形态特征上、生化水平上都具有相似性[l.21，而 且各种条件可以人为的控制。因此体细胞胚胎发生体系被认为是研究胚胎发育的良好替代体系。体胚发 生因其用于基础研究的巨大潜力，具有高度遗传稳定性和高效转化为完整植株的能力而受到广泛研究。 植物的体细胞胚胎发生还是研究植物细胞全能性的良好实验系统，对其机理与调控研究是目前植物细胞 工程的前沿和优先发展领砂 ·门。在植物体细脚胚胎发生机制的研究中，大部分局限于胡萝卜、首蒋、 天仙子等草本模式植物。由于实验体系的局限性，所得到的信息不能代表全部植树习。因此，在木本植 物建立一个良好的实验体系并进行其发生扫U塑的研究是非常必要的。 龙眼和荔枝是我国两种重要的热带亚热带木本特产果树。有关龙眼荔枝的体胚发生研究，因其在龙 眼荔杖遥传改良人工种子制作胚胎发育调控等方面的重大应用价道较早就受到重抓近10年来， 我们在国家自然科学荃金、居英东教育荃金会高校青年教师基金、教育部首批高校骨干教师资助计划和 福建省自然科学羞金等项目资助下，比较全面、深人地进行了龙眼、荔枝体胚发生及其应用侧究.在龙 我们建立了龙眼胚性意伤组织仍时叮电epiccallus,EO),悬浮培养细跑胞、原生质体等高频率体胚发 眼上，我们建立了龙眼胚性意伤组织(EmbryoB 生和植株再生系统[6121，这是目前木本植物最优良的体胚发生 木本植物体细鲍胚胎发生的 实验模式系统6[71.在荔枝上， 了高频率的体胚发生系统以及 胚性细胞悬浮培养系统。但是 困难等现象，这也是多数 .国家教育部名英冻教育荃金会高等学杖润呼书师羞金(71026),国家自然科学药金 ,国家欲育部首批高等 学校骨干教师资助计划 (2000-65)和祠建省自然科学基金 (B0010014,097030,F99003)等资助项目的部分内容. 木本植物体胚发生研究中普谊存在的问题.因此，荔枝体胚发生系统可作为砚加同准物体胚异常的一 个实验系统。利用龙眼荔枝的休胚发生系统，进行了遗传转化研究，获得了龙眼、荔枝的转基因植株; 进行龙眼荔枝属间的基因组或部分荃因组转移.也取得阶段性进展(1.161.同时，我们采用细胞生物学、 牛NI*化以及分子生物学等手段，进