一株产胶原酶海洋微生物发酵条件地研究.pdfVIP

一株产胶原酶海洋微生物发酵条件的研究 白 杨 钱斯日古楞 王红英 大连工业大学生物工程学院，辽宁大连 116034 摘要：于海洋污泥中筛选得到的Aeromonassp.F3所产的胞外酶对胶原蛋白有水解作用，采用单因素试 验法对Aeromonassp.F3的发酵条件及培养基组分进行全面优化，提高该胶原酶生产菌的产酶效率。经优 化试验结果表明，该菌株最佳发酵条件为：培养时间24h,温度40℃，初始pH为8,装瓶量80ˋ100mL/250 mL；培养基组分为：葡萄糖3g/L，酵母浸粉9g/L，NaCl5g/L，MnS0,10mg/L。经优化试验明显提升了 该菌株的产酶能力。 关键词：胶原酶；发酵条件；优化；酶活 FermentationConditionsofaCollagenase-ProducingMarineMicroorganism BaiYangQianSirigulengWangHongying SchoolofBiologicalEngineering,DalianPolytechnicUniversity,DalianLiaoning116034 Abstract:Aeromonassp.F3screenedfrommarinemudshouldsecreteaproteasetohydrolyze collagen.ThefermentationofAeromonassp.F3wasinvestigatedthroughsingle-factortest.The mainfactorsincludedfermentationconditionsandthemedium.Withsinglefactortrial,the optimalcultureconditionwasdetermined:40℃ offermentationtemperature,pH8andvolume 80～100mL/250mLfor24h.Theoptimalliquidmediumwas:3g/Lglucoseascarbonsource,9 g/Lyeastextractpowderasnitrogensource,5g/LNaClasinorganicsaltand10mg/LMnSO4as metalion.Undertheoptimumcondition,theenzymeactivityincreasedveryobservably. Keywords:collagenase;fermentationconditions;optimization;enzymeactivity 物源胶原酶，微生物源胶原酶4只提取方便，而且具有更广的应用范围曲3。许多 土壤、皮毛、海水来源的微生物都能产生胶原酶¨训，例如一些梭菌、弧 菌和类菌体等。笔者对试验室提供的产胶原酶菌株彳e凇∞船ssp．F3的培养条件 及培养基组 第一作者简介：白杨，男，1984年出生，硕士，主要从事生物活性物质及酶性 l：baidenuo@163．com。 质的研究。E-mai 通信作者：钱斯日古楞，男，1969年出生，副教授，博士，主要从事酶的改性 及应用性研究。通信地址：116000辽宁省大连市大连工业大学生物学院，E—mail： sr912000@163．com。 分进行优化设计，以期提高其胶原酶的单位产量。 l材料与方法 1．1试验时间、地点 试验于2009年9月一2010年6月在大连工业大学生物工程学院发酵工程试 验室进行。 1．2试验材料 菌株月P瑚肋朐ssp．F3由试验室提供，于海洋污泥中筛选分离。 1．3试验方法 1．3．1 仪器与药品 本研究室内使用仪器为上海U立电器有限公司生产的冷冻 离心机，上海精密科学仪器有限公司生产的UV755B紫外分光光度计。试剂均为 国产分析纯。 1．3．2种子培养基的制备在斜面上挑取一菌环接种于LB培养基中，30℃180 rpm条件下摇瓶培养24h，即为种子培养基。冰箱4℃保存，种子培养基使用时 间4i宜过长。 1．3．3酶液的提取取发酵液8000rpm低温离心5min，去沉淀取上清液。冰 h． 浴条件下，边搅拌边缓慢加入乙