血小板生成素(TPO)诱导的细胞内信号途径地研究.pdfVIP

血小板生成素(TPO)诱导的细胞内信号途径的研究* 吴超群1 高瑞兰2 BengH．thon93 1复旦大学生命科学院遗传所 2浙江中医学院附属医院血研室 3澳大利亚新南威尔士大学 【摘要】血小板生成素(TPo)是近年克隆的造血生长因子。们Po通过与其受体 MPL的结合调节细胞的增殖、分化。最初研究仅限于对血小板形成方面的作用，以 后越来越多的实验结果证明TPO还作用于早期造血干细胞，并能诱导其体内动员 达异常增高，而且大多数急性粒细胞白血病的原代细胞中TPO受体MPL的表迟也 异常升高。可以认为TPO参与了正常和恶性血细胞增生的调控。但是这种调控的 机理尚不清楚，因此对TPO诱导的造血细胞内信号途径的研究具有重要的理论和实 践意义。 在细胞丝裂原诱导的信号途径中，NFkB族蛋白占有重要地位。研究表明NFkB 参与调控许多与细胞增殖及分化有关的基因。但是对NFkB在造血相关基因的调 控，和耶O诱导的造血干细胞增殖、分化方面的作用尚不明了。本文证实TPO可诱 用。综上所述，我们首次报道TPO诱导的“酪氨酸激酶(眦)一蛋白质激酶C (PKC)／NFkB—Ren(p65)”信号途径。 血小板生成素(砸的)是近年克隆的造血生长因子。TPO通过与其受体MPL的结合调节 细胞的增殖、分化。最初研究仅限于对血液巨核细胞的作用，更多的实验结果证明TPO还作 病细胞株的TPO受体MPL的表达异常增高，而且大多数急性粒细胞白血病的原代细胞中 TPO受体MPL的表达也异常升高。可以认为TPO参与了正常和恶性血细胞增生的调控。 但是这种调控的机理尚不清楚，因此对TPO诱导的细胞内信号途径的研究具有重要的理论和 实践意义。 NFkB族蛋白是具有选择性DNA结合活性的转录调控因子，在丝裂原诱导的细胞内信号 途径中，占有重要地位。同时，新近的研究表明NFkB参与调控许多与细胞增殖及分化有关的 ’本项目受浙江省自然科学基金(398500)和澳大利亚血液学会(Am8∞78)资助 ·—-—-135·——— 但是对NFkB在造血相关基因的调控方面的作用尚不明了。推测TPO的活性可能涉及 NFI圆族蛋白的作用。 ， Re[A(p65)”信号途径。 1材料与方法 HansonCentreforCancer LK赠，The IL一3依赖的人巨核细胞M07e／IL-3(Dr．Ashman 动力学和形态学分析证实其对rhuTPO的绝对依赖性，以该细胞为模型研究TPO的作用。 针，与经rhurhuTPO(购自RD System Cruz (p65)，p50和p52的单克隆抗体(购自Santa 的蛋白成分及活性状态的分子构型。 细胞体内的研究包括构建含2x5’一a黝a盯TCC一3’(2xl【B)序列增强子的氯霉素醛 自New England 活性及转录活性的调控。 2结果与讨论 2．1 TPO诱导NFidi蛋白DNA结合活性 经rhuTP0刺激6h后．EMSA检测可见细胞和蛋白与双链DNA探针结合形成两个泳速 逐渐增加，浓度为250 用於M07e／n，O细胞后所产生的特异性复合物。 ～136— 二联体。但是由于很少部分C1仍不被抗人Re执(p65)抗体阻滞，提示未知转录调控蛋白形 式的可能性。 图l-IlD诱导NFkB蛋白DNA结合活性 A．经n℃刺激4 h后，EMSA检测可见细胞和蛋白与双链DNA探针结合形成两个泳速不同的复合物：较慢的复 不明显。(3次重复实验结果相同) 同培养也不能诱导DNA结合活性。(3次重复实验结果相同) 滞c1的移动(泳道5)；