第二篇IL18在内毒素血症及出血所致急性肺损伤肺内的表达.docVIP

翻译2： IL-18在内毒素血症或出血所致急性肺损伤肺内的表达 出血和内毒素血症是急性肺损伤进展的重要危险因素。IL-18是新近发现的细胞因子，成熟期释放，其活性形式由IL-1转换酶（ICE）的酶切作用于前IL-18而形成。IL-18具有多种免疫调节作用，包括促进IFN-γ，IL-1β，TNF-α和细胞间黏附分子-1（IDM-1）的产生。为检测IL-18在急性肺损伤的作用，我们在内毒素血症和出血的动物模型中检测IL-18的表达，同时检测IFN-γ，IL-1β，TNF-α和细胞间黏附分子-1的表达。出血和内毒素血症后肺IL-18 mRNA水平增加。但是只有内毒素血症模型的肺及血浆IL-18蛋白浓度升高。ICE的表达在内毒素血症中增高，但出血模型中未增高。IFN-γ的表达在两者中均增加，肺组织IL-12 mRNA水平仅在内毒素血症中增加。这些结果表明出血和内毒素血症导致肺中免疫调节细胞因子表达为两个不同的模式。并且，两者肺中ICE表达的差异可能影响下游细胞因子活性形式的产生，包括IL-18。出血后肺内IFN-γ的表达可能通过不依赖IL-12和IL-18的途径进行。IL-18可能在调节内毒素血症所致急性肺损伤的发展过程中起重要作用，但是与出血所致的损伤无明显关系。 急性肺损伤（ALI）和其最严重的表现形式，急性呼吸窘迫综合征（ARDS），每年在美国大约有15万人发病。感染和出血是两种主要的，公认的易导致ALI发生发展的诱因。内毒素血症或出血可引起多种前炎症细胞因子表达的增加，包括小鼠肺细胞内的TNF-α，IL-1β，IL-1α，IFN-γ，巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)α和IFN-γ水平的增加。这些实验结果与临床ARDS患者体内IL-1β，IL-8，TNF-α和IL-6水平和接受机械通气治疗的患者对照升高相一致。近来有研究发现，ARDS患者BALF中前炎症因子活性较血浆中显著增高，提示肺是炎症发生的主要地点。 IL-18，亦称为IFN-γ诱导因子，最初在肝枯否细胞中分离。IL-18在肺，皮肤，骨骼肌，肾和胰腺中有表达。体内试验发现，IL-18可增加IL-1β, TNF-α, IL-8, IL-2的表达，降低GM-CSF和IL-10的表达，上调细胞间黏附分子-1的表达，促进T-细胞增殖，通过Fas-配体介导的途径增加NK细胞活性，还能在肿瘤模型中减少新生血管。 类似前IL-1β，前IL-18缺少信号序列，需要剪切才能形成其成熟和活性形式，以成熟的有活性形式分泌。在这个过程中起主要作用的是ICE。 内毒素血症是急性肺损伤的重要危险因素，IL-18在其基础病理生理过程中起重要作用。最近，研究发现IL-18受体敲除小鼠与野生型相比对内毒素血症有抵抗作用。然而，关于内毒素血症及其他炎性过程如失血时肺内IL-18表达的动力学改变目前未知。因此，我们研究了内毒素血症和出血时肺内IL-18和ICE的表达。因为IL-12和IL-18对于诱导IFN-γ的表达有重叠作用，我们还检测了内毒素血症和出血时IL-12和IFN-γ的表达。 方法和材料 动物 雄性BALB/c小鼠，8-12周龄，Harlen Sprague Dawley (Indianapolis, IN)提供，美国科罗拉多州健康科学中心动物照料处饲养。实验动物12小时白天/黑夜循环任意接触食物和水。 内毒素血症和出血模型制备 动物模型的制备之前已经由本实验室描述。两种模型均在72小时内出现ALI发作，表现在肺内中性粒细胞浸润，肺间质水肿，肺泡内分泌蛋白样物质。 内毒素血症小鼠模型的制备：腹腔内注射0.2ml PBS稀释的脂多糖（大肠杆菌 0111：B4；Sigma,St.Louis,MO）25mg/kg，对照组腹腔注射0.2ml PBS。出血模型小鼠模型：甲氧氟烷异硫氰酸胍2-巯基乙醇μg总RNA合成cDNA，随机六寡核甘酸本实验室已描述。 半定量PCR法测定5μl cDNA混合物中的IL-18，IFN-γ，IL-12和ICE表达，反应条件为（除了ICE）： 94℃预变性2分钟；变性：94℃ 60s 30~38循环；退火：55~65℃ 60s （依据细胞因子的引物大小）；延伸：72℃ 60 s。最后4分钟72℃延伸。对于ICE，循环条件是：1分钟95℃预变性；变性：94℃ 30s 38~40个循环；30 s 54℃ 退火；60s 72℃延伸。最终5分钟72℃延伸结束。PCR产物进行1.6%琼脂糖电泳，EB着色。控制循环数使PCR产物在刚刚能看到和接近饱和状态以下。管家基因G3PDH和HPRT作对照。凝胶分析采用密度计量仪（ImageStore 5000; UVP, San Gabriel, CA），通过比较待测细胞因子PCR产物相对于管家基因的相对吸光率做凝胶分析。 IL-18蛋白测定 采