原发性胃癌分子细胞遗传学变化地研究.pdfVIP

原发性胃癌分子细胞遗传学变化的研究 t朱亚青朱正纲刘炳亚王璐陈雪华张奕尹浩然林言箴 上海第二医科大学附属瑞金医院上海消化外科研究所。上海。200025 宰朱亚青，现在江苏省常州市第三人民医院。江苏常州，213001 王璐。上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所。上海．200025 【摘要】目的：探讨原发惟胃癌分子细胞遗传学的变化。 方法：用比较基因组杂交(comparativegenomie of 微卫星位点分析胃癌18q21杂合性丢失(10ss BTAK和CAS三个癌基因扩增情况。 结果：CGH发现胃癌常见扩增区域(20％)有8q，20q，17q，3q，7q，1 个位点中至少一个位点出现LOH的频率为78％(39／50)。D18S450LOH发生率最高，达48．9％，最小共同丢失 区位于D18S450和D18474间。18q21LOH多见于淋巴结转移和TNMIX期和Ⅳ期胃癌病人。胃癌中SMAD2和 癌突变率高于TNMI期和Ⅱ期。ZNF217扩增率为11．36％，多见于直径≥5 基因相对拷贝数显著高于正常胃粘膜，扩增率分别为16．67％和29．73％。CAS扩增多见于淋巴结转移者。 结论：原发性胃癌中有多处染色体区域发生DNA拷贝数畸变，这些区域中可能存在与胃癌发生发展相关的癌 CAS癌基因可能在部分胃癌中发挥作用。 关键词：胃肿瘤比较基因组杂交遗传不稳定性杂合性丢失DNA拷贝数畸变基因突变基因扩增 胃癌发生发展涉及多种基因和多种遗传学改变，目前认为大多肿瘤存在两种水平遗传不稳定性，小部分在核 苷酸水平；更多在染色体水平，包括染色体整条或区域性丢失或扩增。染色体扩增和丢失区域存在与肿瘤发展密 切相关的癌基因和抑癌基因。由于传统实体瘤核型分析技术的困难，有关胃癌分子细胞遗传学变化还知之甚少。 比较基因组杂交(comparativegenomic 传学技术[1]。一次实验可提供一全基因组扫描图。为进一步探讨胃癌分子遗传学变化及其与临床病理学关系， 本研究用CGH分析原发性胃癌的遗传学变异，以期能发现一些畸变的染色体区域，进而发现胃癌相关癌基因和抑 癌基因。 材料和方法 任何化疗和放疗。肿瘤和正常胃组织在手术切除后立即液氮速冻，一80℃保存。所有标本常规HE染色，记录病 理学变化。其中，男29例，女2l例，中位年龄60岁(26—85)。 提基因组DNA。 Grove，IL，USA)经切口平移法直接标记。 (Vysis，Dowem 2．原位杂交：制备正常男性外周血淋巴细胞分裂中期染色体，于变性、系列酒精脱水处理。标记的肿瘤探针 和白细胞探针与Colt一1DNA混合，乙醇沉淀，溶于杂交液中，经变性、复性处理后，加于载有变性染色体的玻 片上，37℃杂交72小时，DAPl复染。 3．数字图像分析：多色荧光显微镜观察，CCD拍摄图象，经CytoVision4．1软件处理，得到一张多色数码图 26 l 像，进行核型分析，计算每条染色体绿／红荧光比值，正常染色体缈红比值为0．85一1．15。DNA拷贝数变化判断 标准：绿／红比值小于或等于0．75时为丢失；大于或等于1．25时为扩增；大于或等于1．5时为高水平扩增。 of 四、PCR—SSCP检测18q21杂和性丢失(10ss 2条分开的主要条带时，为信息个体，当正常胃组织扩增产物仅为一条条带时，为非信息个体，不能判断LOH。 肿瘤组织与正常组织比较，其中一条信号强度明显减弱或消失，为LOH；如出现异常条带，为微卫星不稳定(mi— crosatellite 减弱50％以上时．为LOH。 五、SMAD2、DPc4和DCC基因突变分析 突变。 PRISMTM 2．基因测序：PCR—SSCP有异常条带者，用ABI377型DNA自动测序仪测序。 六、ZNF217、BTAK和CAS基因扩增 相对拷贝数大于正常DNA相对拷贝数2倍，为基因扩增。 7一cAGAGcAAATl℃AGAAG