血清白蛋白的分离、纯化.docVIP

生物化学实验指导 内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室 2006-3-31 目 录 总 论…………………………………………………………………………… 2 生物化学实验基本操作、基本技术及原理………………………… 2 第一章 生物化学实验基本操作…………………………………………… 3 第二章 实验样品的制备…………………………………………………… 7 第三章 分光光度法………………………………………………………… 8 层析法……………………………………………………………… 10 电泳法……………………………………………………………… 14 第二篇 生物化学与分子生物学实验………………………………………… 18 实验一 血清白蛋白的分离、纯化与鉴定………（综合性实验）…… 18 实验二 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳……………………………… 20 实验三 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）…………………………… 21 实验四 核酸的提取和鉴定……………………………………………… 24 实验五 影响酶活性的因素……………………………………………… 27 实验六 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制…………………………………… 30 实验七 乳酸脱氢酶及辅酶Ⅰ…………………………………………… 32 实验八 碱性磷酸酶的提取、比活性及Km测定…（综合性实验）……33 实验九 乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖电泳法测定………………………… 40 实验十 血糖的测定及激素对血糖浓度的影响………………………… 42 实验十一 血清脂蛋白电泳………………………………………………… 45 实验十二 肝脏中酮体生成作用…………………………………………… 46 实验十三 纸层析法鉴定转氨基作用……………………………………… 47 实验十四 实验十三 聚合酶链式反应及产物鉴定（PCR）…………… 49 实验十五 质粒DNA的快速提取制备及酶切鉴定 (综合性实验) …… 51 实验十六 从人血清中分离纯化一种球蛋白………（设计性实验）…… 55 总 论 21世纪是生命科学的世纪,生物化学与分子生物学是当代生命科学领域中一门重要的基础学科,它涵盖的基础理论,基本知识,基本技术与医学研究各学科领域密切相关,其理论与技术的发展,推动了生命科学的发展,对人类的科技进步与文明产生巨大影响。 生物化学实验是医学院校学生必修的一门独立的基础实验技术课程，其研究技术的发展与应用是依据物理学、化学及生物学的基本理论和实验方法而建立起来的。20世纪20年代微量分析的发展，30年代电子显微镜的出现，40年代层析技术和电泳技术的兴起，以及同位素示踪技术、各种光谱技术、核磁共振技术的应用，激光、超导等新技术的出现，电子计算机技术的突飞猛进，使生物化学实验手段提高到一个崭新的水平，掌握生物化学实验方法和研究技术，对医学院校学生来说是十分重要的。 本门课程主要侧重于给学生以基本的实验方法和技能的训练，让学生了解并掌握生物化学的四大基本实验方法，即：分光光度法、离心法、层析法和电泳法。同时也注意引进一些新近发展起来的、重要的生物化学及分子生物学研究技术，作为学生学习其他专业课程和进入科学研究领域的准备。 一、实验要求 1．实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期的结果，操作关键步骤及注意事项。 2．实验时要严肃认真专心进行操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果，结果不良时，必须重做。 3．实验中，应及时将实验结果如实记录下来，并请老师当场审核。根据实验结果进行科学分析，按时将实验报告交教师评阅。 二、实验时注意事项 1．进实验室要穿好实验服，以免酸碱腐蚀衣服。 2．进实验室前准备好实验指导、课本、笔记、实验记录本、报告本、文具等。 3．要保持实验台整洁，试剂、仪器应整齐,按次序放置。实验完毕要按各类仪器的清洗方法和要求将仪器清洗干净。 4．实验室是培养学生独立思考、独立工作能力及良好科学作风的重要场所，操作务必认真不得敷衍，室内应保持肃静，不得吸烟、玩闹 ，不得随地吐痰，乱丢纸屑。实验后要清扫实验台面、地面、试剂瓶要码放整齐。 5．要爱护仪器、节约药品。第一次实验时要按仪器清单清点仪器，负责保管，用后如数交还,在使用时如有破损，及时报告，经指导教师检查后填写破损单，按学校规定赔偿。 6．贵重仪器，如分光光度计、离心机等，要尽力爱护，使用前应熟悉使用方法，严格遵守操作规程，严禁随意开动。 7．要节约水电，一经