《第二部分动物生理学》实验指导书.docVIP

动物生理学实验指导书 实验一 基本生理实验操作——蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备（2学时） [实验目的] 　　学习生理学实验基本的组织分离技术； 　　学习和掌握制备蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的方法； 　　了解刺激的种类。 [实验原理] 　　 蛙类的一些基本生命活动和生理功能与恒温动物相似，若将蛙的神经-肌肉标本放在任氏液中，其兴奋性在几个小时内可保持不变。若给神经或肌肉一次适宜刺激，可在神经和肌肉上产生一个动作电位，肉眼可看到肌肉收缩和舒张一次，表明神经和肌肉产生了一次兴奋。在生理学实验中常利用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴奋、兴奋性；刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征等，制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的一项基本操作技术。 [实验对象] 　　蟾蜍或蛙 [实验药品] 　　任氏液、食盐、1% H2SO4滤纸 [仪器与器械] 普通剪刀、手术剪、眼科镊（或尖头无齿镊）、金属探针（解剖针）、玻璃分针、蛙板（或玻璃板）、蛙钉、细线、培养皿、滴管、锌铜弓（或电子刺激器）、酒精灯。 [实验方法与步骤] (一)标本制备 1.破坏脑脊髓：左手持蛙，用食指下压吻端，拇指按压背部，使蛙头前俯；右手食指沿两鼓膜正中向后触摸，触及一凹陷处，即枕骨大孔。用蛙针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔，再向前伸入颅腔，捣毁脑；向后插入椎管，捣毁脊髓。或把铁剪刀插入口裂，沿两眼后缘剪去头，再以蛙针捣毁脊髓。待蛙四肢肌肉紧张性完全消失，即表示脑和脊髓已破坏完全。 2.剪除躯干上部及内脏：在腋部用铁剪刀剪断脊柱，将头、前肢和内脏一并弃去，仅保存一段脊柱和后肢。脊柱的两旁可见坐骨神经丛。 3.剥皮：先剪去肛门周围皮肤，然后用左手捏住脊柱断端，右手捏住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤。标本放入盛有林格液的小烧杯中，将手及用过的器械、蛙板洗净，以免皮肤分泌物污染神经-肌肉标本。若标本系电生理实验用则禁止撕皮，需用剪刀剪断皮下结缔组织来分离皮肤。 4.分离标本为两部分：沿脊柱正中线将标本均匀地分成左右两半，分别作进一步剥制。 5.游离坐骨神经：用大头针将蛙下半身俯位固定在蛙板上，用玻璃分针在半膜肌和股二头肌之间分离出坐骨神经。注意分离时要仔细用剪刀剪断坐骨神经的分支，勿伤神经干，前面分离至脊柱坐骨神经丛基部，向下分离至膝关节。保留与坐骨神经相连的一小块脊柱，将分离出来的坐骨神经搭于腓肠肌上，去除膝关节周围以上的全部大腿肌肉，用铁剪刀刮净股骨上附着的肌肉，保留下半段股骨。 6.分离腓肠肌：在跟腱上扎牢一线，提起结线，剪断结扎线外的跟腱，游离腓肠肌至膝关节处，将膝关节以下小腿其余部分全部剪去。至此，标本制成(图2-1)。 7.标本的检验：将标本置于蛙板上，用锌铜弓(或电子刺激器)刺激坐骨神经，若腓肠肌收缩表明标本的兴奋性良好。将标本放入林格液中待用。 注意事项： 1.制备标本过程中，应随时用林格液润湿神经和肌肉，防止干燥。 2.游离神经时，切勿用玻璃分针逆向剥离，以防损伤神经干，又要避免金属器械对神 经的不必要触碰。 3.避免蟾蜍皮肤分泌物和血液等污染标本，也不能用水冲洗标本。 实验二 血液实验（学时）1红细胞比容的测定[实验目的]??　　学习和掌握测定红细胞比容的方法。 [实验原理]? 　　将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中，定时、定速离心后,有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）（图6.1-1）。 [实验对象]? 　　动物种类不限 [实验药品]? 　　草酸盐抗凝剂(0.8?g草酸钾·H2O?+?1.2?g草酸銨·H2O?+?甲醛1?ml?+?蒸馏水至100?ml)或10?g·L-1肝素，橡皮泥或半融化状态石蜡，75%酒精。 [仪器与器械]?? 　　毛细玻璃管（内径1.8?mm，长75?mm）或温氏分血管,酒精灯，水平式高速毛细管离心机(或普通离心机)，天平，注射器，长针头，干棉球，刻度尺（精确到mm）。 [实验方法与步骤]? 　　1.微量毛细管比容法 　　（1）以抗凝剂湿润毛细管内壁后吹出，让壁内自然风干或于60?～80干燥箱内干燥后待用。 　　（2）取血：常规消毒，穿刺指（或尾）尖，让血自动流出，用棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出后，将毛细管的一端水平接触血滴，利用虹吸现象使血液进入毛细管的2/3（约50?mm）处。 　　（3）离心：用酒精灯溶封或橡皮泥、石蜡封堵其未吸血端，然后封端向外放入专用的水平式毛细管离心机，以12000?r·min-1的速度离心5?min。届时用刻度尺分别量出红细胞柱和全血柱高度（单位?mm）。计算其比值，即得