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OS 5p - AZ 002 叶绿素荧光异质性的概念以及相关解决方案 叶绿素荧光异质性是指对单个叶片表面荧光的测量时，叶绿素荧光的变异性。对绝大多数的应 用，它并不是研究的重点。但对某些类型的植物胁迫和特定环境下的测量，叶绿素荧光的异质性则 会导致许多问题。 Baker (2008) 的研究表明，在干旱胁迫和低温胁迫下，叶绿素荧光具有显著的异质性。这意味着， 如果使用标准的荧光仪对同一叶片不同位置进行测量，测量结果可能会具有显著的异质性。 也有其他研究表明，在病毒和细菌感染的生物胁迫下，叶绿素荧光也存在显著的异质性（Osmond 1998, Lohaus 2000, Nebal 2000 ），在非稳定状态条件下，光合作用的初始化也会导致显著的叶绿素荧 光异质性 (Baker 2008) 。当光合作用初始化时，在特定光强下，植物通常需要15~20 分钟达到光合 稳定状态 (请参考我们关于Y Ⅱ的相关应用笔记) (Maxwell and Johnson 2000) 。幸运的是，几乎所有 光适应测量参数都要求光合作用达到稳定状态（由参数的定义决定）。当前为广大研究者所接受的、 用于测量光合初始化的协议是快速光曲线（Ralph 2005 ），以及lake 模型淬灭参数Y(NO) (Klughamer 2008) 。 考虑到叶绿素荧光异质性的影响，在测量特定植物胁迫类型时，需要设计出相应的方案来控制 或处理叶绿素荧光的变异。 生物因子 叶片和植物组织病毒或细菌感染仅能在感染的部位、并且在感染的早期进行检测。在这种情况 下，荧光成像技术可以提供快速的检测，也可以使用常规的非成像叶绿素荧光仪。在 Dr. Claus Buschmann （叶绿素荧光成像和叶片病毒感染方面研究的专家）的一封邮件中，他强调了使用荧光 仪测量应考虑的事项“实际上非荧光成像技术同样具有优秀的表现，点式测量较成像技术成本更低， 并且如果你需要，你可以获得更好的光谱分辨率，因为点式测量具有更强的荧光信号强度；另一方 面，成像技术则可以获得统计的置信区间（或者你需要几个点的测量），并且你也会获得更多的信号 类型，这可能帮助你获得更多的信息来对结果进行解释。” 综上所述，Dr. Buschmann 建议对同一叶片进行多点测量，用于检测和测量生物因子胁迫的效应。 叶绿素荧光的异质性，图片由Dr. Buschmann 提供 干旱胁迫 在C 4 植物中，Y(II)和ETR 是测量干旱胁迫的有效工具。而对于C 3 植物，仅Burke (2007, 2010) 的研究结果表明叶绿素荧光在干旱胁迫测量中的可靠性。这被认为是由光呼吸和Mehler 反应的效应 (Flexas 2000) 。因此建议C3 植物使用Burke 检测方法。在C 4 植物中，同一叶片不同位置的多点测 量可能表现出异质性，有助于获得更好的结果，并且荧光成像技术在分辨率较低时，同样可以获得 该现象。当CO2 气体交换和荧光仪联合使用时，会减少使用荧光仪单点测量导致的误差。荧光仪与 气体交换设备联用时，可以测量同一面积的平均叶绿素荧光 (更多信息请联系我们) 。 低温胁迫 低温胁迫同样需要考虑使用多点测量的方法。尽管荧光成像技术会显示叶绿素荧光的变异，不 同位置的多次测量成本更低，而分辨率更高。在进行胁迫测量前，需对要样品的测量进行规划。气 体交换和荧光仪连用同样会获得更好的结果，因为相较于单点测量，使用整个测量室的平均值有助 于减少测量误差 (更多信息请联系我们) 。 结论 在测量生物胁迫、干旱胁迫和低温胁迫时，必需考虑荧光异质性的影响，在光合作用初始化时 同样需要考虑。使用标准的荧光仪时，需要对样品的测量进行规划设计，以获得可靠的结果。异质 性是可以被诊断的，此外，同一叶片多点测量求平均值可以获得更好的测量结果。 文献 Baker N.R, (2008) Chlorophyll Fluorescence: A Probe of Photosynthesis In Vivo Neil R. Baker Annu. Rev. Plant Biol. 2008. 59:89– 113 Burke J. (2007) Evaluation of Source Leaf Responses