GNA基因转小麦品种地研究.pdfVIP

Journal 2002，10(3)增刊 农业生物技术学报 ofAgriculturalBiotechnology GNA基因转小麦品种的研究+ 徐琼芳’陈孝1 田芳’ 李连城1候文胜2 杜丽璞1徐惠君’马有志1辛志勇 (1．中国农业科学院作物育种栽培研究所，中关村南大街12号； (2．中国农业科学院生物技术研究所，中关村南大街12号) 关键词：GNA基园；bar，基因；基因枪转化；转基田小麦 GNA)基 摘要：以推广小麦品种杨麦158幼胚作为基因枪转化的靶材料，转化雪花莲凝集素(Galanthusagglutinin nigafis 因通过含有选择剂的培养基进行姊选．绿苗移栽花盆放窗台生长到成熟，To代通过PCR扩增及T。代跟踪检测PCR扩增、 RT．PCR检测及抗蚜鉴定，获得33株转基园株系． 全球每年因虫害对农业生产造成的损失高达 1．4转化培养后的愈伤组织移到I／2MS+NAA 20．30％．蚜虫是小麦生产最重要害虫，它不仅取食1mg／L+KT 3_Smg／L的培养基上 Img／L+Bialaphos 损害作物，而且传播病原菌和病毒病．因此，迫切需 诱导化7周(每日10小时光照，24”C)，出现了绿 要控制蚜虫危害，切断传播途径，利用转基因技术将 优良的外源基因导入育种材料，增强作物改良力度， 3_4mg／L)上直到小苗伸长(光照与温度同前)，小苗长 促进品种更新换代，已成为作物品种改良的重要手 3m叽 段．GNA已被广泛应用于抗虫转基因育种中．GNA 的培养基上壮苗，再生植株生长到适宜大小(苗高 对具有剌吸式1：2墨同翅目害虫的抗性己引起科学家 6-8cm)时移入花盆，置于办公室窗台(阳光充足)培 养直至收获． 们越来越多的关注”2。”．Gatehouse等(1994年)报 道GNA能结合到蚜虫肠道上皮细胞的甘露糖位点． 1．5 PCR扩增 进入害虫的循环系统内导致系统性的病发反应．UK 采用酚．氯仿法抽提转基因小麦檀株的DNA做 Eva 模板，依GNA基因序列合成的引物，进行PCR扩 stoger(1999年研究表明，GNA能降低麦蚜的繁 殖力．特别是我国加入了、vTO．要提高国际竞争力，增”2，反应产物在1．5％的琼脂糖胶上电泳． 迫切需要培育抗虫优质品种是保证小麦稳产、高产、 1．6 RT-PCR扩增 优质减少环境污染的有效途径．本研究的目的是利用 为了检测转基因植株的RNA表达，提取单株 基园枪法将GNA基因导入不抗蚜虫的小麦品种获得 RNA试齐j 转基因植株的RNA，方法参照TriZOL 抗蚜的转基因小麦． Kit试剂盒说明书进行，RT．PCR反应产物在1．5％ 的琼脂糖胶上电泳分析． 1材料和方法 1 7转基因植株抗蚜性鉴定 Gbar质粒由中国农 1．1带有GNA基因的pUG4A T，代转基因植株抗病性鉴定在本所温室进行， 科院生物研究所郭三堆组提供． 檀株长出了2片叶子时接上麦二又蚜，每株接3头， 1 2供试小麦品种杨麦158由本实