川芎中两类内酯提取方法地研究.pdfVIP

LC-031 川芎中两类内酯提取方法的研究 赵燕峡丁明玉 (清华大学纯学系北京100084) 川芎为伞形科多年生草本植物川芎(LigusticumchuanxiongHort．)的干燥根茎。它作为 一味传统的中药而广泛用于治疗头痛、贫血、妇女的月经失调等…。在对川芎各种化学成分 进行的研究中，大多集中在对其生物碱中的四甲基吡嗪、酸性成分中的阿魏酸上。而对其内 酯类物质的研究相对较少。 在对内酯进行研究时，常用的方法是用水蒸汽蒸馏法获得挥发油，再用GC-MS““。进行 分析。随着HPLC-MS在理论和技术方面的不断成熟，越来越多的人开始采用这种分析手段 进行中药化学成分的研究。然而伴之而来的问题是，采用什么样的样品前处理方法以使我们 对于待分析样品的性质有较清楚的认识，从而给后续的成分定性带来方便。 根据川芎内酯的结构，可以将其分为两类：第一类为在苯酞的母体结构或3位的取代基 上含有羟基，如洋川芎内酯F、I”’、s…及洋川芎内酯G“3等(见图1)；第二类不含有羟基， 如丁基苯酞、丁烯基苯酞…、洋川芎内酯A、新蛇床内酯“1及蒿本内酯“1等(图2)。针对这 样的特征我们采用了不同的提取方法，并用HPLC．MS对这两种样品进行了初步的结构确 认，证明了这种提取方法在研究川芎内酯时是可行的。 图l 洋川芎内醇F的结构 图2洋川芎内硝A的结构 1实验部分 1．1仪器与试剂 SBC18柱。 系统过滤的超纯水，其它试剂均为分析纯。Agilent公司的Zorbax 1．2实验条件 液相色谱条件：流动相A：甲醇；流动相B：0．1％乙酸水溶液。梯度洗脱程序：O～40min 液相色谱一质谱条件：液相色谱条件同上。质谱条件：ESI(电喷雾电离)接口：正、 负离子检测模式：质量范围：100—500(M／z)。 样品前处理：称取川芎粉末约209，用200ral的75％乙醇水溶液浸泡2小时；在90。C下回 流提取2小时；过滤，在残渣中加入200ml去离子水，于95℃下回流提取2小时，滤去残渣； 合并两次提取液，并在其中加入适量无水乙醇以沉淀蛋白、多糖等杂质；滤清提取液，在真 空下蒸发溶剂至干；加入适量水溶解固体总提物。用1％硫酸水溶液超声提取三次，滤去残 渣；用Na0H溶液调至碱性；用氯仿萃取，挥去有机溶剂，得到第一类内酯。用与前面提取第 一类内酯相同的方法得到固体总体物：用水溶解后用乙醚萃取；用NaOH除去乙醚相中的酸性 成分后将剩余乙醚相中的有机溶剂挥干，得到第二类内酯。在分析前用甲醇溶解，微孔滤膜 过滤。 2结果与讨论 2．1液相色谱分离条件的选择 为了后续定性实验的方便，我们优先选择C-s柱作为固定相，以酸水溶液中加甲醇作流 动相。由于川芎内酯类化合物结构很相似，在等度洗脱的条件下难以在较短的时间内实现对 它们的相互分离，因而使用梯度洗脱进行分离。在选定的色谱条件下得到图3所示的谱图。 (A) re) (A)第一类内酮的色谱圈 (B)第二类内酯的色谱图 囤3两类川芎内醴的色谱图 2．2川芎内酯的定性 从图3可以看到(A)中的峰I和(B)中的任一峰不具有相同的保留时间，而且保留时 间较小，可以认为是由于羟基的存在使其极性增强。这样可初步断定这两种提取方法得到了 两类性质不同的内酯。在HPll00上得到较好的分离结果后，再在APl3000上用相同的液相色 谱条件进行质谱定性分析。根据LC-bIS的结果确定了(A)中的峰1和(B)中的峰i-5的分子 量。(A)中峰i：224； 据文献报道，洋川芎内酯H、I、I的异构体的分子量均为224。因此(A)中的峰1对应其中的 一种或几种。而洋川芎内酯A的分子量为192，丁基酰内酯、蒿本内酯E和z的分子量为190。 因此，(B)中的峰i对应洋川芎内酯A；峰2—5中的三个对应上述三种第二类内酯；至于多出 的一个峰可能是梯度洗脱造成的假峰或另一种新的内酯，尚需做更深入的研究。总之，通过 HPLC-MS的鉴别，可以进一步证明前面的提取方法可以得到两类结构不同的川芎内酯。