纳米粒子Tie-2小干扰RNA抑制肝癌生长和血管生成研究.pdf

叟虫幽盔堂堂主堂焦迨塞 和血管生成的研究 博士研究生：邓 伟 导 师：梁力建 教授 专 业：外科学 中文摘要 肝细胞癌 HCC 是世界上最常见的富血管，高转移恶性肿瘤之一，在临床 上病情常进展迅速，并伴随有进行性腹痛，肝脏肿大、黄疸、体重下降、腹水形 成。它病情快速进展常和血管生成有关，但是，血管生成在肝癌进展中的机制还 内皮细胞特异性的受体酪氨酸激酶Tie．2的配体，在血管新生中起重要作用，Tie．2 调节着血管内皮细胞与周细胞的连接，在血管成熟中不可缺少。Ang家族可能在 肝细胞癌的恶性行为中起重要调控角色，使用小分子干扰RNA靶向抑制 Ang／Tie．2可能为肝癌的治疗提供一种有效方法。 第一部分 血管生成素／Tie．-2和VEGF在人肝细胞癌组织的表达 及血管生成作用 目的研究劬g及受体Tie．2、血管内皮生长因予 VEGF 在肝细胞癌血 管生成和进展中的作用。 方法用RT-PCR和免疫组织化学方法分析了28例肝细胞癌、lO例肝硬化 和10例正常肝标本。探讨Ang及受体、VEGF的表达和HCC肿瘤血管生成和 临床病理的关系。 结果Ang．2／Tie2、VEGF在肝细胞癌中表达明显上调，免疫组织化学也显 竺虫幽盔鲎堕主雯堕迨塞 侵犯及CD34染色的微血管密度相关。 结论Angrrie·2、VEGF在HCC肿瘤血管生成和进展中起重要作用。 第二部分纳米技术包裹小干扰RNA表达质粒抑制体外 血管内皮细胞Tie-2受体的表达 转染能力和基因沉默效果。 方法：应用分子克隆的方法构建Tie一2一siRNA质粒，将其制备纳米微球，扫 描电镜观察其形态和粒径，DNaseI消化验证其对质粒DNA的保护能力。然后转 染原代人脐带静脉内皮细胞，观察纳米Tie．2siRNA微粒干扰Tie．2基因表达的效 果及其对血管内皮细胞的干扰效应。 结果：扫描电镜观察到Tie．2．siRNA纳米微球呈球形和椭球形，大小分布均 匀，包封完整，分散性良好。对质粒DNA有较好的保护作用并有较强转基因能 力，良好的RNA干扰效果，在转染第五天可以观测到血管内皮细胞增殖率下降， 凋亡率和细胞迁移抑制率增高。 结论：成功制备纳米Tie．2siRNA微粒，并证实其载基因能力和RNA干扰效 果，对血管内皮细胞有抑制其生存和迁移能力效应，为进一步研究Ang／Tie一2在 肝癌进展中的机制和肝癌的抗血管治疗提供理论依据。 裸鼠移植瘤作用的研究 interference 2 目的：探讨Tie．2小干扰RNA smallRNA，siRNA 对HepG 细胞裸鼠皮下移植瘤的作用。 方法：将肿瘤细胞植于6周鼠龄的裸鼠后背皮下，荷瘤鼠分为对照组及实验 组，分别用Tie-2．siRNA／纳米颗粒、生理盐水／纳米粒子瘤内注射，检测基因治疗 前后肿瘤体积。质量变化，血清AFP及肿瘤组织学变化。 照组 34．63±4．07 有显著性差异 P 0．01 。 鱼虫幽盔室煎土堂焦迨塞 结论：Tie2．siRNA抑制肿瘤生长和肿瘤血管生成，为肝癌的基因治疗开辟 了新的思路。 关键词：肝肿瘤，血管生成素／Tie．2．，小干扰RNA，纳米粒子、血管内皮 细胞，微血管密度， 基因治疗 ———!虫些盔皇熊主堂焦迨塞 一 The of siRNA Study Nanoparticles-Tie-2 Inhibiting And Growthof Angiogenesis Carcinoma Hepatocellular M．DCandidatej Wei Deng Tutor：ProjLijian Liang Abstract One ofthe and tumorsin commonest，devastatinghigh-metastasis malignant the worldishepatocellular clinicalfeaturesare carcinoma HCC whose rapid progression，increasing lossandthe fomation pain，hepatomegaly,jaundice，weight ofascites．Itisatulllor whose is associatedwith rapidprogression frequently mechanismsof Angiogenesis，however，theneovascularizationthat the permitrapid hasnot growth been havebeen as identified defined．Angiogenin Ang recently for vascular Tie2 ligands kinase be