rna提取步骤.docVIP

RNAfast200 ? ???????????????? 总RNA 极速抽提试剂盒 ? 适用范围：细胞、组织、全血、骨髓、体液、细菌、病毒 ? Catalog no. 220010 50 次 ? ? 保存条件：室温，保质期2年。 ? 技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。 性能介绍： ? ? ? 样本量 全血10-1,000μl，培养细胞1×107，组织30mg，细菌1×109，体液（尿液、腹水、胸水、脑积液等）根据具体细胞量 试剂 3种（提取细胞浆RNA为4种） 步骤 4步：裂解，吸附，清洗，洗脱 耗时 7-10min 柱容量 200μg total RNA 洗脱体积 25-50μl 得率 90% 产量 1-5μg/ml全血，100-300μg/1×107细胞，1-6μg/ mg组织，50-200μg/1×109细菌 纯度 OD260/OD280: 1.9－2.1 特点 1.???????? 可能是目前国际上速度最快、步骤最少的总RNA提取方法 2.???????? 获得的RNA质量与Trizol提取相同，但操作更稳定，RNA不易丢失，不同提取批次间变异小，较少发生DNA和蛋白质污染 3.???????? 获得的RNA完整性好，纯度高，得率高，可以满足目前所有的后继实验要求 4.???????? 适用性广，可同时适用于动物组织、细胞、细菌、植物组织等的总RNA提取 5.???????? 可直接处理血清、血浆及其它体液 6.???????? 非常适于临床标本病毒RNA抽提用于RT-PCR检测 7.???????? 生产全线除RNase处理及防护，所有容器及试剂除RNase处理 用途 普通RT-PCR，定量RT-PCR， NASBA，表达芯片分析，cDNA合成，构建cDNA文库，RPA，Northern Blot，mRNA筛选等 ? 试剂盒组成：( Catalog no. 220010 50 次) ? RA1 10ml（仅提取细胞浆RNA时使用） RA2 30ml 洗液 60ml（已加有15ml） 洗脱液 10ml 内套柱，外套柱 50套 钢网，平皿，研磨棒 需要时另配（提取组织RNA时用） 说明书 1份 ? 操作流程： 实验操作前请先认真阅读“注意事项” ? 1． a．?? 3ml淋巴细胞分离液，在上层小心加上2-3ml抗凝全血，1,500rpm室温离心15min，吸取中间层细胞至1.5ml eppendorf管，加入生理盐水1ml，4,000rpm离心2min，倒去上清，加入生理盐水100μl，充分振荡形成细胞悬液，直至没有细胞团块（重要）； b．?? DEPC处理的PBS或生理盐水（约1ml/30mg组织），用研磨棒将组织研磨挤压过钢网，收集过网悬液，取100μl放入eppendorf管中（也可采用液氮中捣碎或冰浴中匀浆的方法）； c．?? 100μl/2×106细胞），充分震荡直至没有细胞团块（重要）。取100μl放入eppendorf管中；贴壁细胞消化后处理同上。 d．?? RNA提取方法时，取上述组织研磨液或各类细胞悬液离心（2,000rpm×2min），去除上清后充分振荡致细胞团松散，加入RA1液（100μl/1×107细胞或30mg组织），充分振荡混匀30s，再离心30s，吸取100μl上清液放入新的eppendorf管中； e．?? 1-10ml，离心2min，留下沉淀及约100μl上清，充分震荡悬浮沉淀；有时也可以直接取样本100μl； f．???? 1ml，离心后留下细菌团块及大约100μl上清，充分振荡悬浮细菌，直至没有细胞团块（重要）。 2． RA2液500μl，充分颠倒混匀1min。 3． 1min。 4． 500 μl洗液，离心1min。再重复此过程洗一次。 5． 1min。 6． eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液（或pH7.0的DEPC处理水）25-50μl，室温静置1min，离心1min，获得总RNA。 ? 注意事项： ? 1.??????? 试剂盒室温保存，保质期2年。 2.??????? 离心速度均为12,000rpm-14,000rpm，室温离心（有条件可4℃离心）。以eppendorf 5417离心机为例，12,000rpm＝13,362g，其它类型离心机转速应达到相近的g数。 3.??????? 首次使用时在洗液瓶中加入45ml无污染的分析纯无水乙醇，用后拧紧瓶盖。 4.??????? 避免环境中RNA酶污染，操作要戴手套，所有枪头和eppendorf管以DEPC水处理，移液枪保证洁净无RNA酶污染。