微流控芯片技术分析细胞外酸性环境对肿瘤细胞P-糖蛋白表达、活性及其介导的道诺霉素细胞毒性的影响.pdfVIP

中 国 医 学科 学 院学 报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE · 论 著 · 微流控芯片技术分析细胞外酸性环境对肿瘤细胞 P-糖蛋 白表达、 活性及其介导的道诺霉素细胞毒性的影响 李 远，向 姣，张莎莎，刘北忠，龚 放，彭明清 重庆医科大学附属永川医院中心实验室，重庆402160 通信作者：彭明清 电话：023电子邮件：mingqig“qing@yah00．corn．an 摘要 ：目的 采用微流控芯片技术分析细胞外酸性环境对肿瘤细胞P一糖蛋白 (P-gP)表达、活性及其介导的道诺霉 素细胞毒性的影响。方法 在微流控芯片上将A549细胞分为实验组和对照组，实验组用 pH为6．6酸性细胞培养液处理， 对照组用pH为7．4中性培养液常规培养，芯片上进行细胞免疫荧光技术分析P．gp表达，罗丹明123外排实验评价P—gp活 性，细胞存活／凋亡荧光染色法分析道诺霉素的细胞毒性。结果 微流控芯片可为A549细胞生长提供适宜的微环境，细胞 在72h后融合度能达到90％以上。酸性细胞培养液处理对P—gp表达未产生显著影响，但可显著增强P—gp活性，处理时间 6h时A549细胞P—gp活性达到峰值。酸性细胞培养液处理6h后道诺霉素细胞毒性效率显著降低，在P—gP抑制剂维拉帕 米协同作用下道诺霉素细胞毒性得到逆转。结论 微流控芯片技术可缩短分析时间，降低试剂耗量，为进一步认识肿瘤多 药耐药机制和高效肿瘤耐药逆转剂筛选提供新的技术平台。 关键词：多药耐药；酸性细胞外环境；P一糖蛋白；微流控芯片；细胞毒性 中图分类号：R一331；R73—3 文献标志码：A 文章编号：1000—503X(2015)01—0075-07 D0I：10．3881／j．issn．1000—503X．2015．01．014 AnalysisoftheImpactofExtracellularAcidityon theExpressionandActivityof P-glycoproteinandontheP-glycoprotein-mediatedCytotoxicityof DaunorubicininCancerCellbyM icrofluidicChipTechnology LIYuan，XIANGJiao，ZHANGSha—sha，LIU Bei-zhong，GONG Fang，PENGMing—qing CentralLaboratory，YongchuanHospital，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing402160，China Correspondingauthor：PENGMing—qing Tel：023E-mail：mingqingqing@yahoo．corn．ca ABSTRACT：Objective Toexploretheimpactofextracellularacidicenvironmentontheexpressionand activityofP-glycoprotein (p-gP)andontheP-gP-mediatedcytotoxicityofdaunomycinincancercellsbyusing microfluidicchiptechnology．Methods TheA549cellsculturedonamicrofluidicchipweredividedintoexpefi· mentgroupandcontrolrgoup．Theexperimentgrou