微生物来源的醛糖还原酶抑制剂N99-253B地研究.pdfVIP

以及瘤组织细胞内DNA指数检测结果表明，阿霉素叶酸脂质体具有较好抑瘤效果，虽抑瘤率(71％)略高于 一琥珀酸一卵黄磷脂酰乙醇胺，其不仅是具有寻靶的重要膜材料，也是保障脂质体膜免受破坏的高分子材 料，可以预见，叶酸脂质体在循叶酸受体途径导入HeLa229细胞过程中，不易产生类似普通脂质体那样的膜 融合释药现象，故而采用瘤旁给药进行的抑瘤试验，更有利于普通脂质体发挥抑制肿瘤生长作用，但即便如 此，阿霉素叶酸脂质体的抑瘤率也还大于普通阿霉素脂质体。 综上所述，叶酸脂质体是一种较为理想的抗肿瘤药物载体，阿霉素叶酸脂质体具有作为抗肿瘤药物的潜 在应用价值，但要进入临床应用，仍需提升其实用性，进一步开展诸如拓展抗肿瘤谱和各种给药方式对其抑 瘤作用影响等因素的研究。 微生物来源的醛糖还原酶抑制剂N99—253B的研究 任晓，董悦生，张华，倪会敏，刘梅，单越琦，马瑛，刘宇 (华北制药集团新药研究开发中心天然药物室，石家庄050015) 大量的动物和临床试验日益证明，体内聚醇通路中的关键限速酶一醛糖还原酶(AR)的抑制剂(ARI) 能有效改善和延迟糖尿病并发症的发生。醛糖还原酶(AR)广泛存在于哺乳动物组织中，它催化己糖的还原 反应，使葡萄糖和半乳糖转变为各自的还原产物山梨醇和半乳糖醇，它们在体内的蓄积导致了一系列糖尿病 并发症。因此，研制醛糖还原酶(AR)的抑制剂(ARI)引起了制药工业的极大关注。 本试验小组从新疆、云南土壤中分离得到的放线菌，从中找到活性代谢物N99—253B，本文报道了其筛 选、发酵、分离纯化、结构鉴定及其生物学活性。 1仪器与材料 低温超速离心机Beckman(J2—21)。BTG815生化分析仪(上海分析分析仪器厂)。中压层析系统(德 柱：Kromasil g．6mmx 100ACl8 250mm(分析用)。Phenomenex (Sigma公司)。其他试剂为分析醇。 2实验方法与结果 2．1筛选用样品的制备 液。每种发酵液加等体积的乙醇浸泡，离心，取上清蒸干乙醇，用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯提取物作为筛选用 样品。 2．2筛选方法 用硫酸铵分级沉淀的方法从猪晶状体中提取醛糖还原酶用于筛选。测活反应的样品管中加入：NaPi 缓冲液(pH6．2)、适量的酶液和样品的甲醇溶液；对照管以甲醇代替样品的甲醇溶液；空白管以甲醇代替样 始反应。用生化分析仪测定340nm处每minOD值的变化量。 样品抑制率=悸g髟蠹爱割案跨E斗念要髟删×100％ 其中，抑制率大于80％的通过株为N99—253。 2．3通过株N99—253的发酵 1156 钙4％，pH7．O)，27*(2培养72hr，转接于46号发酵培养基，在2TC培养144h。 2．4 N99 253的分离和纯化 硅胶为60 本相同，合并二者，浓干得N99 253B纯度为98％。 2．5 N99—253B的理化性质 H20q，在261nm N99—253B为白色粉末，可溶于甲醇、乙腈、乙酸乙酯和DMSO等溶剂。分子式为Ql 处有一强吸收峰，在326nm处有一弱吸收峰。 2．6结构解析 李糖为n 7一a—L—rhamnoside。 氢一1苯并吡喃一4一酮为同一物质，又名：genistein 3生物学活性 3．1 N99—253B对醛糖还原酶的抑制作用 把N99 IC50=0．075mg／ml。 3．2 N99—253B对0一半乳糖苷酶抑制作用 据文献检索，该化合物与TADAHIKO 一致。 4结论 在筛选微生物来源的醛糖还原酶抑制剂的过程中，发现阳性菌株N99—253，对其代谢产物进行研究，分 离出活性物质N99—253B，该化合物对醛糖还原酶的抑制活性虽然属于中等强度，但由于它为异黄酮类化 合物，毒性较低，这对于以后的结构改造和开发成药大有裨益。(参考文献略) 1157