利用液相基质进行精确质量测定地研究.pdfVIP

第20卷增刊 分析测试学报 V01．20 FENXI Instrumental CESI-H of 2001年7月 XUEBAO(Joumal Jul．200I Analysis) 利用液相基质进行精确质量测定的研究 熊少祥1，陈文章2，辛斌1，胡伟华1，王光辉1 (1．中国科学院化学研究所分子科学中心北京质谱中心，北京100080； 2．中国矿业大学化工与环境工程系，北京100000) 物、化学、医学等领域…。随着应用的深入，对其测定的质量准确度要求越来越高。尤其在最近火热的蛋白 时，可能仅有1个候选蛋白。传统的固相制样法存在样品结晶不均匀、信号寿命短、不同类型的样品难以同 液相基质制样法，则可以克服固相制样法的弊病，得到稳定而持久的检测信号。因此本文探讨了利用液相基 质进行精确质量测定的可能性。实验结果表明：液相制样法样品分布均匀，所有样品在任何一点都可得到强 度稳定的检测信号，因此可以用内标法对样品进行精确质量测定，并且具有操作简便的特点。 1 实验部分 BiflexⅢ型MALDI—TOF质谱仪(Bruker Daltonics，Inc．)，氮激光器，激光波长337nln，采用延时引出和反 射的工作方式，正离子检测。 硝基苄醇等溶剂，形成不同组成的液相基质。多肽、环糊精、杯芳烃、卟啉等化合物被选用为标准物或样 品。 于200 上，送人质谱仪，累加若干次扫描信号得到质谱图。类似条件下，用固相法制样，得到相应质谱数据，以资 比较。 2结果与讨论 通常的精确质量测定采用曲线拟合法，典型的TOF方程如下n】： t=a(m／z)o5+b，Vo=0 (1) 又可表示为： (m／z)“5=A t+B，Vo=0 (2) 立的重要前提条件是‰为零，实际上离子初始速度‰并不等于零，加之溶剂、结晶过程等难以控制因素的 影响，都会使上述方程变为非线性方程，从而给测定结果带来较大的误差。当利用液相制样法进行精确质量 测定时，虽然不能彻底消除上述误差，但由于液相制样法离子初始速度y。比固相制样法小约2个数量级¨1， 而且液相制样法信号稳定，可变因素易于控制，因此液相制样法的线性相关性优于固相制样法的线性相关 性。 由于液相制样法样品的电离机理与固相制样法有所不同，因此实验时，需要适当调整仪器参数，如增加 延迟时间和延迟电压。刚开始采集数据时，为了打破液体表面张力对离子溅出的束缚，激光强度需要增强， 随着轰击次数的增多，激光强度可逐渐减小，有利于得到分辨率高、强度大的检测信号。采集数据时样品最 基金项目：国家科学技术部专项经费、国家自然科学基金20035010)资助课题 分析测试学报 第20卷增刊(2001) 子空间电荷会导致系统误差，因此内标与样品的峰强度不可相差过于悬殊。 当利用固相制样法进行精确质量测定时，由于其非均匀制样方法的固有缺陷，经常出现样品峰、内标峰 不能同时出现，或2者峰强度相差太大的情况。尤其当样品、基质、内标物的脂溶性或水溶性不同时，溶剂 的挥发性不同、样品的溶解度差异，导致结晶时3者难以混合均匀。相比之下，利用液体基质进行精确质量 测定时，溶剂无需完全挥发而使样品结晶形成固相，因此不存在样品混合不均匀的可能。只要样品与内标物 的相对浓度较为合适，在样品靶的任何一点，样品和内标峰都可以同时出现，且强度十分稳定，这无疑为精确 质量测定提供了必要的条件。 测定时，不同的计算方法对最终结果有显著的影响。实验结果表