应用转基因小鼠的研究心力衰竭的进展.pdfVIP

应用鞋基固小鼠研究。垒边塞塑的进展 杜晓军 (实验心脏学研究室，B妇医学研究所，墨尔本，囊大利亚) 近十年来，随着小鼠基因库的破译，小鼠胚胎干细胞的研究和基因干预技术的进展，已有大量转基因 (’IB)小鼠品系问世。通过对某一靶基因的干预(如利用t心肌凝蛋白启动子介导的过度表达、劓除、诱 变等)，目前已建立了140多种具有各种心脏表现型的小鼠品系。这些Tc小鼠品系为在整体水平研究心 脏疾病的分子机镧和基因治疗提供了系统的和全新的工具。与此同时，近几年在小鼠心脏生理学领域也 取得了显著进展。隧着心功能测定仪器的微型化，多种无剖和有剖性技术，例如左心导瞥术，超声心动图 检测，核磁共振成像，心输出量测定方法，心脏电生理技术，已经普遍应用于TG小鼠的研究中。目前许多 研究组已经能够应用多种方法精确地定量在体小鼠的心脏功能并已积累了大量的有关小鼠血流动力学 的赍科。另外，在小鼠上利用显微手术和非手术方法复制心脏疾病模型也有了长足的进步。随着1G小 鼠品系的系统化，研究手段的成熟和成果的积累，1G小鼠已成为心脏研究的重要手段。 目前利用1G小鼠进行关于心肌肥大和心力衰竭的研究主要采用以下几种手段：(1)通过心脏表现型 的确定来研究心力衰竭的分子机制；(2)寻找适宜于心力衰竭基因治疗的靶基因；(3)通过在1B小鼠上复 制实验性心脏病变来研究某种基因对心力衰竭发生发展的影响；(4)对具有心力衰竭表现型舶1G小鼠给 予药物治疗。 目前已有大约50余种1G小鼠品系具有心肌肥大表现型，30余种TG小鼠品系已确认发生心力衰 竭。这些小鼠品系的靶基因包括心肌收缩蛋白及其调控因子(如表达诱变的*心肌凝蛋白重链A琅4∞ cllI，剔除mmle uM肿地in，mP)，与。蛋白结合的受体以及信息传递通路成份(如过度表达十或B-肾上 腺素能受体，G∞．G啦蛋白)，细胞内钙调节及信息传递因子(如mk．呲min)，细胞分裂因子和生长因子(如 过度表达肿瘤坏死因子，盯叮)，等等。这些小鼠品系的心脏表现型为认识心肌肥大和心力衰竭的分子机 镧提供了重要依据。过度表达胆．肾上腺素能受体(陋AR)达200—300倍的小鼠在低月龄时其心肌收缩 功能显著高于对照动物。为了探讨过度表达胁AR的长期影响，我们最近应用超声心动圈技术研究了 陋^R1B小鼠4一15月龄期间的心脏表现型，发现1G小鼠自9月龄起出现进行性心腔扩大，左室缩短分 数和室壁收缩增厚分数进行性下降。至15月龄时的累计死亡率达8I％，其壹要死因为重度心力衰竭。 病理学检查发现心肌广泛的纤维化，心肌细胞丢失和显著的心肌肥大。这些表现型证明长期的阻．AR高 水平的过度表达可造成纤维化性心肌病和心力衰竭。Ij目醇n等最近报道，过度表达露．AR小鼠的心肌病 均具有相似的心脏表现型，提示B_肾上腺素髂失控地激活是导致心肌病变和心力衰竭的重要机制。在确 定TG动物心脏表现型时，前瞻性实验设计和跨年龄段的连续心功能观察至关重要。 心力衰竭的基本病理生理异常是心肌收缩性减退，因此提高心肌收缩功能是心力衰竭基因治疗的研 究重点。目前巳发现大约30余种7Ic小鼠品系具有心肌收缩功能增强的表现型，包括过度表达01．AR， (H卫)。这一系列’Ic品系的表现型为寻求在整体水平有效的和适用于心力衰竭基因治疗的“正性肌力 分子”提供了重要依据。新近采用的一种研究方法是将具有心肌病的1B小鼠与具有心肌收缩功能增强 的品系进行杂交(c—sbⅫd)来实现基因互补，从而获得届时具有两种干预基因的新品系，通过研究该新 品系小鼠的心脏表现型可以确认某种基因干预是否有效。眦P剔除小鼠具有典型的扩张性心肌病和高 病死率的心脏表现型。Ro幽m∞等研究了表达肚H缸和加LP剔除小鼠舶杂交后代，发现表达8^Rkt可 以防止扩张性心肌病的发生。chi衄等通过杂交加LP和咖剔除小鼠也获得相似的结果。将过度表达 致的心肌病变。但将G耐IG与陋RKct或过度表达肛AR小鼠杂交则无效。因此，增强昏AR心肌信息系 统仅对某些心肌病和心力衰竭模型有救。 另一种研究途径是在7Ic和对照小鼠上复饲实验性心脏疾病模型，通过对心肌肥大和心功能异常程 度的比较来研究某种基因对心力衰竭发生发展的影响。目前较多应用的小鼠心脏疾病模型包括注射睛 ·1022· 心肌病毒(删cv或c、，B)引起的心肌炎，胸主动脉缩窄(TAc)所致的压力超负荷和结扎左状动脉造成心 肌梗死。患病毒性心肌炎的小鼠具有典型的充血性心力衰竭并多