银耳孢糖(峰龄)多糖含量测定方法地研究.pdfVIP

测其细菌内毒素吉量，并无菌保存。每瞒一天在无菌条件下采样，用同样批号鲎试剂检滠其细菌内毒素含 量，共检测9如检测细菌内毒衷方法按中国2000版药典附录中细菌内毒素检查法进行。 法。 隔一天用鲎试验法检测其细菌内毒素含量的变化。共测9日。 2实t螬暴 高压处理1h、5h、24h以后的细菌内毒素溶液．和未高压的细菌内毒素原藏，均放置室捏9日，每日用鲎 试验法检测的结果如图1(略)。从图中可以看出，经商压的细菌内毒素溶液．经过一天室温放置．内毒素音 量也会有一些下降。这大体分析为玻璃壁具有吸附细菌内毒素的能力，而且是在最初的第一天，以后就不吸 附了。图中可以看蓟l、5、24h高压灭活处理的细菌内毒素原藏，处理当天不显示活性，它的活性是原来的十 万分之一。可是这些高压处理的内毒素水溶液的内毒素括性在1--2d后就有恢复上升趋势。它的恢复速度 一)．第4天上升至8EU／ml，以后就保持平稳状态。 致热性比较发现，高压24小时的原液稀释10倍后已投有致热活性。而原液稀释10倍仍然有致热活性。 3讨论 以往人1订常常用馥碱法除热原，即加3％稀盐酸，或3％NaOH溶液，脂多糖的多糖链被切断，形成单糖 斯片、KDO健，这样致热性就下降了。但由于多糖的片断链和KD0链也有致热性，只是它的致热性比LPS 整体下降了。当LPS量少时，理经过加酸加碱，可将LPS浓度下降至致热阀值以下。但在以往人们认为高 压灭蕾加热不会使细菌内毒素失活，通过本次试验，我们认为高压加热时间达到24d时虽然内毒素失活有可 逆性，但是，回升程度小，可以达到低于兔子和人的致热阿值。在将来药品生产中是有实用价值及现实意义。 比如有些糠皮塞．不能用300℃干热灭菌除细菌内毒素，但是用酸碱处理后，再经过高压往往就鲍洧除热原。 我们认为高压加热清除热原主要原因是：热原由于它的分子结构上的特性，在水中常常以凝集成巨大分子团 呈胶状不均一形式存在。据报导，巨大分子团致热活性最强。我们推测，高压时间较短时(1h或5h)内热原、 巨大分子团结构一时被破坏、分散，使致热活性暂时下降，又由于分子运动，经过24h小时或48h，巨大分子 团形成所以致热活性又上升。但由于加热后有一小部分细菌内毒素被分解成片断，因此它致热活性强度不 可能恢复到原来水平。丽高压时间较长时，热高压不仅从物理性方面破坏了巨大分子团，而且LPS车身也 被分解、破坏，因此致热性下降。据报导“LPS”的致热活性中心虽然是u曲执部分，当它与核心多糖链用 别LipidA部分的构造，使细茵内毒素失去大部分的致热括性并使它不可逆。是一种可行除热原舶方法。 (参考文献咯) 银耳孢糖(峰龄)多糖含量测定方法的研究 高虹何堆英 李昔 (中国医学科学院一医药生特技术研究所一中国协和医科大学 北京 100050) 银耳孢糖(商品名：峰龄)为中国医学科学院医药生物技术研究所北京市北抗药厂，中国医学科学院放射 医学研究所研制。该药是一种野生真菌。通过擞生物工程，深层发酵提取的多糖类药物，具有治疗辐射损伤、 增爱身体免疫功能、提升白细胞、抗肿瘤、抗肝炎等多种作用。其含量涮定原质量标准采用涮崽氟甚控捌产 品质量．此法不适用于银耳孢糖多糖古量测定。本文根据文献报道，苯酚．硫酸法可铡定多糖含量，对谖方法 709 进行了研究，现报告如下。 1仅■、试剂与样品来纛 (硫酸，苯酚均为分析纯)；标准品：D(+)一葡萄糖(分析纯)试验样品：北京市北抗药厂赛店分厂、杭州中美华 东制药厂提供。 2方法依据 2．1嗳收渡长及线性关系确定 琵性关系良好。符合线性关系要求。 2．2稳定性试验及精密度 取一定浓度的对照品溶液和样品溶液，各加人苯酚一硫酸试剂0．05ml，摇匀。迅速加入硫酸5ml，摇匀， 于l，2。3，4，5h(室温25℃)在468nm处测定吸收值。结果发现，吸收值无明显变化。 明本法重现性好．精密度高，可满足定量分析。 2．3回收率试验 精密称取0．059葡萄糖置小烧杯中．加蒸馏水溶解，定量转移至50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度， 播匀。精密吸取lml溶液至25ml容量瓶中．加蒸馏水稀释至刻度．摇匀。再精密吸取2ml置试管中，按标准 曲线(2．1)项下操作测定，回收率为99．32％。 3样品一定 适量，精密称定，用蒸值水定量稀释成每毫升约古40f-tg为对照品溶液。再精密吸取对照品与供试品各2ml 吸收值，计算结果见表1。