石花菜硫琼胶的提取与抗凝血活性的研究.pdfVIP

石花菜硫琼胶的提取及抗凝血活性的研究+ 刘力 李智恩 徐祖洪 中国科学院海洋研究所，青岛266071 NaCl， 摘要：石花菜琼脂经DEAE--eellulose分级，得到四个级分，其中1．Omol／L 2．5mol／L NaCl两个级分的产率较低．分别为2．80％和2．03％；而其硫酸基含 量较高，分别为22．8％．32．5％。这两个级分的混合物合称为硫琼胶，其硫酸 12．5mg／ml，25mg／ml剂量范内，石花菜硫琼胶具有体外抗凝血活性；口服可以吸 收，产生体内抗凝血作用。在100mg／kg“·d～，200mg／kg“·d～，400mg／kg 1·d-1剂量范围内，大鼠连续灌胃15天，石花菜硫琼胶可以明显延长全血凝血 明显降低血浆纤维蛋白原(Fib)含量。 关键词：分级，石花菜硫琼胶．抗凝血活性 褐藻和红藻中含有一定量的硫酸多糖，已证实它们具有不同程度的抗凝血、 降血脂、抗肿瘤等活性。例如，降解的角叉菜多糖具有抗肿瘤活性[11．褐藻多 糖硫酸酯具有抗凝血活性Ⅲ，紫菜多糖具有抗凝血活性Ⅲ。抗凝血活性不但与多 糖中硫酸基含量有直接关系，而且可能与海藻种类、多糖构成、硫酸基的结合 状态有关㈠。为了探索海藻多糖的抗凝血活性，刘志峰等人‘铂对海带(Laminaria japenicaSresch)、鼠尾藻[Sargassum 藻[$cytosiphon L．]、 Kutzing]五种海藻多糖的硫酸基含量及其体外抗血小板聚 刚毛藻[CJadophora 集作用进行了观察。 琼脂分级的产物分为两大类：一类是中性琼脂糖：另一类是由硫酸基含量 较高和很高的酸性半乳聚糖组成的复合物，简称硫琼胶。为了深入研究石花菜 硫琼胶的抗凝血活性．为今后的药物开发提供依据，本文以石花菜琼脂为原料， 用DEAE--Cellulose分级方法提取硫琼胶，并测定其硫酸基含量及体内外抗凝血 活性。 l实验材料 1．1石花菜琼脂 于2000年5月自山东青岛薛家岛采集石花菜，由本实验室采用高温稀碱法 处理石花菜原藻，然后采用常规方法提取琼脂拍]。 1．2实验动物 新西兰兔4只，雌雄各半，由山东省青岛市药品检验所提供。Wistar大鼠， 雄性．由山东省青岛市药品检验所提供。 1．3试剂 福建太阳生物技术公司生产的凝血酶时间测定试剂盒，凝血酶原时间测定 试剂盒，活化部分凝血活酶时间测定试剂盒：上海玉兰生物技术研究所生产的 全液体纤维蛋白原免疫比浊法测定试剂盒。 1．4实验仪器 FAl004分析 多用真空泵：电热恒温水浴槽：红外灯烘箱；干燥箱：HANGPING Waterbath 天平：BfiCHI B一480旋转蒸发仪。 2实验方法与结果 2．1石花菜硫琼胶的提取 取29琼脂粉末．加lOOml蒸馏水，室温下溶胀1．5h，在压力锅中加热至 DEAE纤维素，搅拌均匀， 0．05KPa恒压30min，配成2．o％的琼脂热溶液。加入89 NaCl溶液洗 75。C下·叵温lh。趁热依次用400ml蒸馏水、O．5、1．0和2．5mol／L NaCl 脱。洗脱液均分两次加入．前后两次洗脱液合并。由0．5，1．0和2．5mol／L 溶液洗脱得到的三种洗脱液分别用1．2×10’dalton的透析袋在开放式的自来水 槽中透析12h，然后用蒸馏水透析12h，浓缩透析液，用4倍体积的95％Z,醇沉 淀．放置过夜，260目筛绢过滤，红外灯下烘干，得到分别由0．5，1．0和2．5mol／L NaCI溶液洗脱下来琼脂分级的三个级分。其中后两个级分为高硫酸根级分，即 硫琼