有机相中辣根过氧化物酶(HRP)催化过氧化氢氧化抗坏血酸反应的研究和应用.pdfVIP

一 第十届全固有机分析学术研讨会 有机相中辣根过氧化物酶(HRP)催化 过氧化氢氧化抗坏血酸反应的研究及应用 唐波杜鸣刘阳 (山东师范大学化学系，济南250014) V、／ ．关奠词辣根过氯化物酶有机相酶催化光度艺壤测定坑坏血酸 鬟要本文对有机相中H即催化HA氧化抗坏血酸的反应进行了研究，发现在拢体系中加入自- 机溶剂异丙醇可使反应的灵敏度大大提商，并对最佳反应条件进行了考察。在AsA浓度为0一 100刚吐范围内，吸光度差△A。与AsA浓度成线性关系，方法标准偏差为2．哦，检测限为 4．10IIg／一．。涓定了人J血清中抗坏血酸的含量，结果满意． 1●__一h，I-一 氯酚靛酚(2，6-DIP)法。这些方法不仅费时而且干扰物质多，灵敏度较差。许多学者曾利 用HRP或其模拟酶对水相中H202氧化抗坏血酸的反应有过详细的研究…。我们发现，在此体 系中加入有机溶剂异丙醇可使反应的灵敏度提高。利用标准加入法测定了人血清中抗坏血酸 的含量，结果满意。 1仪器与试剂 0，2mol／LTris和0．2mol／L Hcl混合得到；有机溶剂甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、N，N一 二甲基甲酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、乙二醇等。 2 AsA的测定 HRP，稀释至刻度，摇匀。取3mL 1．7mL异丙醇，不等量的AsA标准溶液，1．OmLO．74rag／mE 溶液于lOnl石英皿中，记录265nm处起始吸光度A O．3％的H202，摇匀， t，然后加入3“l r。 lO分钟后记录终止吸光度A，，吸光度差定义为△A266=A；一A 3各种有机溶剂对HRP催化AsA+H,O：反应体系的影响 3 7．6×i0mol／L， 在AsA+H如体系(AsA、H202、HRP的浓度分别为10 pg／mL， 会加快酶催化反应，而其他溶剂则抑制此反应。 4最佳pH影晌 在pH 6．5—7．5范 4．0-8．0范围内研究pH对反应体系(各浓度条件同上)的影响，pH 围内△A搿最大，我们选择pH7．0的Tris—HCI作为反应介质。 5异丙醇加入量对反应体系的影响 DIl5 第十届伞国有机分析学术研讨会 随异丙醇加入量的增加，吸光度差值不断增大，加入1．7mL异丙醇时对酶催化反应的作 Hj达到最大，我们选择加入异丙醇1．7mL为最佳实验条件。 6工作曲线 j苞围内，吸光度差△Az髓与AsA浓度成线性关系，其同归方程 在AsA浓度为0一】00¨g／mL pg／mL的AsA， 实验结果的变异系数为2．6％，检测限为4．10lag／’mL。 7样品测定 采用标准加入法，取一定量经处理过的血清，加入一定量AsA溶液后按实验方法进行测 定，结果见表l。 表1人血清中AsA的测定 AsA加入量‘gg) 、sA测得量(Bg) 平均回收率(％) 变异系数(％