脂肪酶催化拆分环戊烯酮动力学地研究.pdfVIP

脂肪酶催化拆分环戊烯酮动力学的研究 丁永学张铭俊虞星炬 (中国科学院大连化学物理研究所生化工程研究室 大连 116023) 摘要考察了四种不同来=i晕的脂肪酶对环戊烯酮的拆分活性；从中选择PseudomonasCepla Lipas为实验用酶．考察了影响碎裤分反应动力学的凡种因素，结果表明酶拆分的最适温度为40 ℃，pH值为7．o；反应过程存在严重的底物抑制，反盛最终得到舍46．5_单一旋光纯的例一环戊烯 酮． 关t词酶拆分环戊烯酮反应动力学 1前言 对映体的存在是自然界中的一种普遍现象，在有机化学、生物化学和药物化学等领域尤为突 出…。对农药而言。使用光学活性体千t替外消旋体时l不但成倍地提高了药效，而且减轻了生物体 内的积累与毒副作用，避免了不必要的环境污染。因此近年来，有关生物活性与结构之间的关联 立即受到人们的重视，对外消旋农药的光学拆分或光学活性药品的合成竞相开展。 史=也—争 盖m#2十假印一奄= 皿嚣=+童=阶‘ 岱H 曰’ p5。 DH 目前国内外正在研究开发的拆分技术主要有化学拆分、色谱拆分和酶法拆分”1。。其中酶法 拆分与其他方法相比．具有明显的优越性。从理论上说，能区分底物对映体的任何酶都可用于拆 分，但通常更愿意用脂肪酶，原因是脂肪酶不需要辅酶，反应简单易行；已有许多脂肪酶在工业上 大量生产，价格较便宜；其催化作用的底物不仅局限于甘油酯类，还可对其他许多有机酯类化合物 起作用。因此，近年来脂肪酶催化拆分的研究非常活跃””1。 本文以合成丙烯菊酯农药的中间体(±)一4一羟基一3一甲基-2-(2-丙烯基)一2一环戊烯-j-酮(以下 简称为环戊烯酮)为拆分对象，研究了脂肪酶酶促水解反应的动力学规律，考察了温度、pH值、底 物浓度等操作条件对酶拆分的影响，为生产旋光纯的环戊烯酮提供了一条可行途径。该反应路线 如上页。 2实验材料和方法 2．1实验材料 2．1．1实验用酶 Pseudomonas CepiaLJpas：,佃ano公司赞助。 Candida RugaroseLipas：Sigma公司出品。 Artflrobacter chemicalS Co惠赠。 Lipas：Shin—Nihon 假丝酵母脂肪酶(Canaida$p)：中科院北京微生物所提供。 2．1．2环戊烯酮由江苏省农药科技情报站提供。 2．1．3其他试剂均为国产分析纯试剂。 2．2实验方法 2．2．1实验流程 i ： 拌。在lh内往反应液中滴加50IIl环戊烯酮．反应在40℃恒温水浴中进行2h．控制好反应条件， 反应可完全转化。 ! ． (2)酶拆分反应采用间歇度应器，在溶有一定浓度脂肪酶的缓冲溶液中，加入一定量的上一 步合成的环戊烯酮乙酸酯，反应以电磁搅拌为开始：反应在水浴夹套中进行以保证整个体系恒 温。反应终止后，对拆分产物减压蒸馏除去水相后，通过气相色谱测量环戊烯酮及其乙酸酯来考察 反应进程，用HPLC或旋光仪测量酶解产物(励一环戊烯酮的旋光纯度。 2．2．2分析方法 气相色谱分析环戊烯酮及其二酸酯，内标定量。 内标物：丁二酸二乙酯。 ： 色谱条件：担体：DMCS：固定液；5％DEGS：柱型：3mmx2m。 旋光分析测定产物(旬一环戊烯酮的旋光值。 3结果与讨论 3．1酶的筛选 j 实验中对四种不同来源、不同生物活性的脂肪酶催化活性进行了比较。实验结果见表1和表 2。 表l四种酶的特性 Candida Arthrobacter 来源PseudomonasCepiasd Rugarb