兴国红红对+PHA+bD+Freund完全佐剂免疫反应地研究.pdfVIP

兴国红鲤对PHA加Freund完全 佐剂免疫反应的研究’ 洪一江林光华 胡成钰邓志辉“ (南昌大学生物科学工程系．南昌330047) 摘要 用PHA加Freund完垒佐剂免疫兴国红鲤，分析其血清蛋白成分，测定了外周血及主要 免疫器官中淋巴细晦，中性粒细晦和单核细胞总值的变化，结果显示：免疫后的血清噩自多出一 种成分，其迁移翠近似于哺乳类的廿球蛋白；胸睬是免疫后20天时的主要免疫反应器官，40天时 脾和体肾中的淋巴细胞才开始增殖}体肾是中性粒细胞的主要免疫反应器官；在脾和体肾中．单 核细胞的总值在免疫后20天耩有增加，而在头肾中的总值则显著减步I外周血中，20天时小淋巴 细胞百分比值显著增高，40天时下降，大淋巴细胞、中性粒细胞和单棱纲胞亦与对熙组有所不同． Freund) 关键调兴国红鳢完全佐剂(PHA 免疫应答免疫器官血清蛋白 鱼类参与免疫反应的组织器官有肾、脾、胸腺等处的淋巴组织以及血液和淋巴等。鱼类 具有类似哺乳动物的T淋巴细胞和B淋巴细胞(李亚南等．1995)；林光华等(1998)比较详 细地描述了兴国红鲤肾和脾脏中血细胞发育过程，描述了各类血细胞不同发育阶段的形态特 征，为区分不同发育阶段血细胞提供了基础资料。植物凝集素(PHA)是一种可溶性抗原，它 是一种分裂紊．能刺激培养的鱼白细胞产生一种生长促进因子，Nowell等在60年代初发现它 具有体外刺激淋巴细胞转化为增殖细胞的作用，目前PHA作为有丝分裂刺激素在淋巴细胞 培养中得到广泛应用。林义浩等(1983)采用PHA在免疫刺激草鱼上做了较为系统的工作． 并在草鱼血清蛋白成分中发现了一种未知成分，暂定名为成分6，其性质不清楚。虽然颗粒性 抗原引起鱼类的免疫应答中细胞成分变化的研究已有一些(邓志辉等，1995；江育林．1991； 林光华等，1998)，但非颗粒性抗原如PHA是否也能引起兴国红鲤免疫器官中与免疫有关的 细胞变化，其变化规律如伺．本研究用PHA加Freund完全佐剂作为抗原免疫兴国红鲤，以 了解兴国红鲤外周血和免疫器官中与免疫有关细胞变化和血清蛋白成分的变化，为鱼类免疫 学研究提供基础资料。 1材料与方法 1．1材料来源及免疫 兴国红鲤取自江西兴国县兴国红鲤原种场，选择从未感染过任何病原体的健康鱼40尾， 雌雄兼有，体重150～200g．分成2组，一组为试验组．一组为对照组，两组鱼饲养在同一生 c，每日按鱼 态条件下两个互相隔离的水簇箱中，氧泵充氧，试验期间的水体温度为20～25 t国豪自然科学基金资助课题(编和江西省自然科学基金资助课题 ·-现在江西省血灌中心工作． 784 体总体重的1％的份量投喂混合饲料，饲养2周后进行试验。 验所产品)，加上等量的Freund完全佐剂按每克体重注射8旭的PHA量对免疫组鱼体进行 注射，对照组注射等量无菌生理盐水。 1．2样品制备 1．2．1外周血样品制备及免疫器官印迹片 剥离出脾、头肾、体肾和胸腺等淋巴器官分别制作印迹片，并用肝素浸过的注射器从鲤 鱼尾动脉抽取血液制作血涂片，将印迹片和血涂片均用甲醇固定，wright和G油nsa双染，随 机计算各类血细胞所占的百分率，并作生物统计学处理。 1．2．2电泳样品制备及测定 免疫后20天取第一批材料，采用断尾法采集血液，分离血清，用聚丙烯酰胺薄层等电聚 焦电泳法分离血清蛋白成分．阳极电极液为1m01／L mol／L NaOH，阴极电极液为1 H，PO。， 起始恒压60V，15分钟后以o．5 mA／cm凝胶宽恒流，当电压升至580V时再恒压，电泳过 程均在4℃冰箱中进行。考马斯亮蓝G一125染色，冰乙酸脱色，甘油保存。照相后，采用cs一 9000双波长薄层色谱仪扫描。 2结果 2．1外周血中淋巴细胞数量变化比较 根据血涂片随机计数200个白细胞，统计淋巴细胞的百分比，将淋巴细胞分为大淋巴细 胞和小淋巴细胞，它们的差异比较见表1。